人鳞状细胞癌细胞株(A431)中NET-1基因对癌细胞增殖和浸润的影响

• 作者: 吴园园 李惠 王建力 秦婧 陈莉
• 来源期刊: 中华病理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RNA 小分子干扰 寡核糖核苷酸类 反义 细胞系 皮肤肿瘤 癌 鳞状细胞
• 年，卷（期）: 2009,（10）
• 所属期刊栏目: 实验病理学
• 页码范围: 691-696
• 页数: 6页
• 分类号: R73
• 字数: 6157字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0529-5807.2009.10.010

摘要

目的 探讨小分子干扰核酸(siRNA)对皮肤鳞状细胞癌(简称皮肤鳞癌)细胞株(A431)中NET-1基因的抑制作用,及其基因对癌细胞增殖、浸润的影响.方法 构建针对人NET-1基因的siRNA NET-1真核表达载体(pU6H1-GFP-siRNA NET-1),转染A431细胞后通过半定量RT-PCR检测细胞中NET-1 mRNA水平以筛选较有效的siRNA NET-1.同时设置针对NET-1的正、反义真核表达载体和随机序列对照组siRNA表达载体,体外瞬时转染A431细胞,RT-PCR、Western blot分别检测癌细胞内NET-1 mRNA和蛋白的表达,经免疫荧光染色在激光共聚焦显微镜下观察NET-1蛋白在细胞内的表达;四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪分别榆测A431细胞增殖与占不同细胞周期中细胞增殖指数(PI);划痕试验和Transwell迁移试验分别检测A431细胞的迁移和侵袭能力.结果 测序证实编码NET-1序列的siRNA已经插入载体pU6H1-GFP中U6和H1两个启动子之间,其他载体测序结果 符合设计要求.pU6H1-GFP载体转染A431细胞后其转染率达到80%.转染siRNA NET-1和反义NET-1后分别与未转染组比较,A431细胞中NET-1 mRNA分别减少72%和62%(t值分别为-36.01,-17.65;均P<0.05)和蛋白表达水平分别减少61%和69%(t值分别为-21.13,-33.14;均P<0.05);在转染48 h后能显著抑制A431细胞的增殖、迁移和浸润(均P<0.05).在转染对照组siRNA后并未见到明显的抑制效果.转染正义NET-1后,能分别增加细胞内52%NET-1 mRNA和49%蛋白表达水平(t值分别为12.49,13.98,均P<0.01).结论 靶向NET-1的siRNA真核表达载体能特异、有效的下调NET-1基因蛋白的表达,并抑制A431细胞增殖、迁移和浸润.进而证明内源性NET-1基因的功能与A431细胞增殖、迁移、浸润有关.靶向NET-1的siRNA显示基因抑制效率比反义核酸技术更好.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王建力	南通大学附属医院皮肤性病科	19	54	5.0	5.0
2	陈莉	南通大学附属肿瘤医院病理科南通大学医学院病理学教研室	161	548	10.0	16.0
3	秦婧	南通大学附属肿瘤医院病理科南通大学医学院病理学教研室	22	70	5.0	7.0
4	李惠	南通大学附属肿瘤医院病理科南通大学医学院病理学教研室	2	10	2.0	2.0
5	吴园园	南通大学附属肿瘤医院病理科南通大学医学院病理学教研室	2	11	2.0	2.0