p53基因的原核表达与活性测定

• 作者: 俞亚东 李兴玉 李春炎 杨兵
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 学科: 医学
• 关键词: p53基因 K562 FCM 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 38-41
• 页数: 4页
• 分类号: R4
• 字数: 3083字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-548X.2009.01.015

摘要

目的 原核表达P53重组蛋白,检测P53蛋白对人类白血病细胞系K562增生的影响.方法 运用PCR技术鉴定了pET-p53重组质粒导人BL21菌株中p53基因的存在,并在IPTG的诱导下,大量产生外源基因产物.通过Ni-NAT亲和层析柱纯化分离P53蛋白,SDS-PAGE确定该蛋白准确性.以不同浓度的P53重组蛋白诱导K562细胞后,用MTT比色法、集落形成法、流式细胞术(FCM)测定P53蛋白对靶细胞增生的影响.结果 成功地构建了含人野生型p53基因的原核表达载体,纯化了P53重组蛋白.活性测定结果表明,随着P53重组蛋白浓度的增加,K562细胞存活率显著降低,并发现该蛋白能促进肿瘤细胞凋亡,且呈现明显的剂量依赖性,经相关分析,细胞抑制率与P53蛋白浓度呈正相关(r=0.8981),其半数抑制浓度(IC50)为6.74μg/ml.结论 P53重组蛋白具有促进K562细胞凋亡的作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	俞亚东	上海师范大学生命与环境科学学院生物系	5	51	3.0	5.0
2	李兴玉	上海师范大学生命与环境科学学院生物系	21	148	7.0	11.0
3	李春炎	上海师范大学生命与环境科学学院生物系	3	9	2.0	3.0
4	杨兵	上海师范大学生命与环境科学学院生物系	4	11	2.0	3.0