重组人白介素18的发酵、纯化及功能鉴定

• 作者: 任秀宝 安秀梅 曹水 李慧 杨莉莉
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 白细胞介素18 毕赤酵母 发酵 培养基 分离和提纯
• 年，卷（期）: 2009,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 559-561,后插4
• 页数: 4页
• 分类号: R9
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2009.07.011

摘要

目的:利用构建的重组菌株Pichia pastoris X-33/hlL-18,在3.7L发酵罐中表达重组人自介素18(hIL-18),探讨其大规模发酵及纯化工艺.方法:复苏工程菌X-33/hIL-18于BMGY培养基,在其A600鲫达到6左右时转入发酵罐进行高密度发酵.发酵液经过滤浓缩柱、疏水层析和阴离子交换层析分离纯化.结果:工程菌在3.7 L发酵罐采用甲醇诱导补料批式发酵,在pH 6.0,溶氧值(DO)20%～30%,温度28℃,甲醇诱导48 h重组hIL-18的表达产量为202 mg/L,发酵液经纯化后纯度可达97%以上,并初步证明重组hIL-18能协同IL-2诱导PBMCs分泌IFN-γ和协同IL-2增强NK细胞的杀伤活性.结论:利用Pichia pastoris分泌型表达系统和建立的分离纯化方法,能获得大量较高纯度的重组hIL-18,为进一步研究其活性和功能奠定基础.