曲古霉素A诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡反义cDNA文库的构建和效应基因的初步筛选

• 作者: 卢运萍 吴鹏 周剑锋 王蓓蓓 马丁 马晓黎
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乳腺肿瘤 反义核酸技术 cDNA文库 曲古霉素A
• 年，卷（期）: 2009,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 480-484
• 页数: 5页
• 分类号: R9
• 字数: 4394字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2009.07.012

摘要

目的 构建曲古霉素A诱导人乳腺癌细胞凋亡反义cDNA文库,以筛选曲古霉素A抗肿瘤的效应基因.方法 收集经曲古霉素A处理不同时间点的人乳腺癌细胞MCF-7,提取poly(A)+RNA,将逆转录合成的cDNA反向插入载体PCEP 4中以构建反义cDNA文库.文库DNA随机转入人宫颈癌细胞HeLa中,以转染PCEP 4卒载体细胞为对照组,用200 nmol/L曲古霉素A和200μg/ml潮霉素同时筛选,至对照组细胞全部死亡,文库组仍有存活细胞时停止曲古霉素A筛选.存活克隆扩增后提取Hirt DNA并转化感受态细胞,获得的转化克降扩增后进行酶切鉴定并测序,得到多个EST片段,经生物信息学分析后选择感兴趣的EST片段进行初步功能验证.结果 构建的反义cDNA文库含有2 × 106重组子,重组效率>90%;经DNA测序和生物信息学分析提示第27号存活克隆是锌转运蛋白LIV1,该克隆在功能验证时表现出对曲古霉素A非常显著的抵抗效应.结论构建的反cDNA文库容量较大,质量较高;基因LIV1可能是曲古霉素A抗肿瘤的效应基因之一.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢运萍	华中科技大学同济医院附属同济医院妇产科	130	1016	16.0	25.0
2	马丁	华中科技大学同济医院附属同济医院妇产科	193	1145	16.0	23.0
3	周剑锋	华中科技大学同济医院附属同济医院妇产科	69	346	10.0	13.0
4	吴鹏	华中科技大学同济医院附属同济医院妇产科	40	182	7.0	12.0
5	王蓓蓓	华中科技大学同济医院附属同济医院妇产科	10	27	2.0	4.0
6	马晓黎	华中科技大学同济医院附属同济医院妇产科	6	28	4.0	5.0