原核表达抗克伦特罗重组单链抗体及其纯化研究

• 作者: 刘细霞 孙远明 张宏斌 梁艳 王弘 陈舒迟
• 来源期刊: 中国食品学报
• 关键词: 克伦特罗 单链抗体 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 45-50
• 页数: 6页
• 字数: 4023字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-7848.2009.04.008

摘要

目的:原核表达抗克伦特罗重组单链抗体,对表达的包涵体蛋白进行提取和纯化,并鏊定重组抗体特性.方法:通过温度诱导大肠杆菌表达抗克伦特罗单链抗体,超声破碎菌体细胞,采用不同洗涤溶液提取包涵体.以不同变性剂溶解包涵体,Ni-NTA亲和柱纯化后,经脉冲稀释法将其复性.超滤及透析浓缩蛋白复性液,经Ni-NTA亲和柱二次纯化,得到纯化重组目的蛋白.通过SDS-PAGE电泳分析重组目的蛋白纯度,采用Western bloning和间接竞争EUSA对所制备的抗克伦特罗重组单链抗体特异性进行鉴定.结果:以大肠杆菌Es-cherichia coli BL21(DE3)为宿主菌诱导表达重组单链抗体,产率最高,占菌体蛋白的31%.以1 mol/L尿素洗涤包涵体,6 mol/L盐酸胍为变性剂,经Ni-NTA亲和柱纯化,所得复性重组单链抗体蛋白的纯度达96%.Western blotting分析显示,纯化并复性后的单链抗体可与鼠抗His标签蛋白单克隆抗体发生特异性的结合反应.间接竞争ELSIA结果表明,该重组抗体IC50值为3.35 ng/mL,与沙丁胺醇等结构类似物无交叉反应.结论:原核表达制备的抗克伦特罗重组单链抗体具有较好的抗原结合活性及特异性,为进一步开展克伦特罗的免疫快速检测研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张宏斌		95	457	11.0	16.0
2	梁艳		1	1	1.0	1.0