RNA干扰技术抑制卵巢上皮性癌耐药细胞Topo Ⅱα基因表达并逆转耐药的体外研究

• 作者: 何静 唐步坚 张玮 李力 王琪 黎丹戎
• 来源期刊: 中华妇产科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 卵巢肿瘤 RNA干扰 抗药性 多药 顺铂 DNA拓扑异构酶类 Ⅱ型
• 年，卷（期）: 2009,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 686-690
• 页数: 5页
• 分类号: R73
• 字数: 5030字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0529-567x.2009.09.013

摘要

目的 探讨RNA干扰技术抑制卵巢上皮性癌(卵巢癌)耐药细胞TopoⅡα基因的表达是否能逆转耐药.方法 (1)设计并筛选针对Topo Ⅱα基因的、沉默效果最佳的小分子干扰RNA(siRNA),将其克隆到psilencer4.1-CMV-neo载体上;将psilencer4.1-CMV-neo-Tope Ⅱα重组质粒转染至受试细胞,建立稳定转染重组质粒的细胞Topo Ⅱα siRNA(+)SKOV3/DDP.(2)采用RT-PCR技术和蛋白印迹法测定稳定转染细胞中TopoⅡαmRNA和蛋白的表达;分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法、流式细胞仪和高效液相色谱法测定TopeⅡαRNA干扰前后细胞的耐药指数、细胞周期和细胞内顺铂含量的变化.结果 (1)转染psilencer4.1-CMV-neo-Topo Ⅱα质粒后能抑制SKOV3/DDP细胞中TopoⅡα基因的表达,TopeⅡα siRNA(+)SKOV3/DDP和SKOV3/DDP细胞中TopoⅡα mRNA的表达水平分别为0和0.92±0.08;两种细胞中TopoⅡα蛋白的表达水平分别为0.51±0.04和1.95±0.09,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01).(2)SKOV3/DDP细胞转染Topo Ⅱα siRNA后耐药指数下降,TopoⅡα siRNA(+)SKOV3/DDP和SKOV3/DDP细胞的耐药指数分别为3.46和5.05,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).(3)TopoⅡα siRNA(+)SKOV3/DDP细胞的G_0/G_1期、G_2/M期细胞比例较SKOV3/DDP细胞增加,S期细胞比例减少(P均<0.05).(4)Topo Ⅱα siRNA(+)SKOV3/DDP细胞经20 μg/ml顺铂处理24 h后,其顺铂含量(157.20 ng)较SKOV3/DDP细胞(63.99 ng)升高,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 阻断卵巢癌耐顺铂细胞中Topo Ⅱα基因的表达能逆转其对顺铂的耐受性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李力	广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科	377	1810	20.0	26.0
2	黎丹戎	广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科	120	570	14.0	18.0
3	张玮	广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科	149	564	13.0	17.0
4	唐步坚	广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科	67	353	11.0	16.0
5	王琪	广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科	87	263	8.0	11.0
6	何静	四川省肿瘤医院妇瘤科	5	39	2.0	5.0