同源重组法制备口蹄疫病毒多基因重组腺病毒

• 作者: 刘在新 包惠芳 卢曾军 常惠芸 曹轶梅 谢庆阁 赵启祖 陈应理
• 来源期刊: 畜牧市场
• 关键词: 口蹄疫病毒 重组腺病毒 同源重组
• 年，卷（期）: 2009,（9）
• 所属期刊栏目: 名家专栏
• 页码范围: 14-16
• 页数: 3页
• 字数: 3596字
• 语种: 中文

摘要

通过细菌内同源重组的方法成功构建了含有O型口蹄疫病毒P1-2A和3C蛋白酶基因和3D基因的重组腺病毒表达载体.首先将P12A、5C和3D基因亚克隆连接到穿梭质粒pShuttle-CMV上,再将重组穿梭质柱用Pmel线性化后电转化携带有腺病毒骨架载体pAdeasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态菌,经细菌内同源重组产生pAdcmv-p12×3c和pAdcrnv-p12×3cd重组腺病毒质粒,经序列测定证实目的基因已正确的插入到腺病毒骨架载体中.重组腺病毒质柱经Pacl线性化后转染HEK293细胞,转染1w内细胞出现典型病变.取转染细胞裂解液上清连续传代至第4代时,细胞于24～48h内即病变完全,收取接毒后24h细胞进行PCR和RT-PCR检测,表明目的基因已整合到腺病毒基因组内,且在mRNA水平上有表达.取第4,6、8和10代病毒,用蛋白酶K处理后可扩增出目的基因,证明此重组病毒可稳定存在.本研究为FMDV腺病毒活载体疫苗的研究奠定了基础.