猪支气管败血波氏杆菌菌毛fimD基因的克隆表达及间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 何华 卢顺 向敏 吴斌 张建民 罗勇 裴洁 赵战勤
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 支气管败血波氏杆菌 fimD 克隆 表达 ELISA
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 98-102
• 页数: 5页
• 分类号: S852.614
• 字数: 3454字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2009.01.017

摘要

参照GenBank上支气管败血波氏杆菌的菌毛fimD基因序列(X75811),设计1对引物,从本实验室分离鉴定的猪源支气管败血波氏杆菌中扩增出fimD编码区1 098 bp的片段,将其克隆至原核表达载体pET-28a,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行融合表达.SDS-PAGE和Western blot检测让实该表达产物以包涵体形式存在,大小约42 ku,与用支气管败血波氏杆菌体制备的阳性血清能发生特异性反应.将包涵体变性和复性后包被酶标板建立间接ELISA(fimD-ELISA),特异性良好.用fimD-ELISA检测临床送检的668份血清,阳性率为30.7%.用该法与微量凝集试验平行检测102份血清,fimD-ELISA的敏感性高于微量凝集试验.