转化生长因子β1基因修饰兔B型滑膜细胞复合Pluronic-F127体内构建组织工程软骨

• 作者: 宋斌 宋洋 李卫平 杨睿 黄建荣
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 滑膜 转化生长因子β 转基因 软骨细胞 组织工程
• 年，卷（期）: 2009,（46）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 9055-9060
• 页数: 6页
• 分类号: R318
• 字数: 7816字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.46.011

摘要

背景:兔B型滑膜细胞在转化生长因子的作用下,具有向软骨细胞分化的潜力,形成的细胞在体外可保持软骨细胞的表型,但转染后的细胞能否与支架材料一起形成软骨组织尚没有深入的研究.目的:以脂质体法转染兔B型滑膜细胞,将转染后细胞复合Pluronic-F127在裸鼠体内构建组织工程软骨,观察转染后细胞体内向软骨组织方向分化的可行性.设计、时间及地点:细胞学试验,随机分组动物实验,于2007-04/2008-05在中山大学附属第二医院医学研究中心完成.材料:3月龄健康新西兰大白兔,雌雄不限,4周龄体质量为20 g左右的BALB/c裸鼠共12只,雌雄不限.方法:取新西兰大白兔膝关节腔内面的滑膜组织,以酶消化法进行分离培养、纯化、传代,以脂质体法进行转染,以G418筛选阳克隆,同时检测转化生长因子β1、Ⅱ型胶原的表达;4℃将Pluronic-F127溶解,配成质量分数为30%液体,然后与转染后稳定表达的细胞进行混合,同时取软骨细胞混合Pluronic-F127、空载体转染细胞混合Pluronic-F127作为对照组,各组细胞浓度均为5×1010L-1的复合物,迅速以0.2mL注射器行裸鼠背部皮下注射,分别在术后4,6,8周处死实验裸鼠,取出裸鼠背部组织进行观察.主要观察指标:细胞生长曲线、转染后细胞表型变化观察、裸鼠皮下组织块组织学观察.结果:生长曲线显示B型滑膜细胞在脂质体法转染后生长活性降低,至转染后6,7d,细胞基本恢复正常的增殖能力,转染后第4天,滑膜细胞转化生长因子β1表达阳性,转染后第7天,滑膜细胞胞浆内抗Ⅱ型胶原染色为阳性,PluronicF-127与B型滑膜细胞混合后在裸鼠皮下4周形成不成熟的软骨样组织,8周形成成熟的软骨样组织,抗Ⅱ型胶原染色为阳性.结论:转染转化生长因子β1基因的B型滑膜细胞在体外可以表达软骨细胞的表型,形成软骨样细胞,而在裸鼠体内复合Pluronic F-127可保持软骨细胞表型,形成软骨样组织.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄建荣	中山大学附属第二医院关节外科	87	757	16.0	23.0
2	杨睿	中山大学附属第二医院关节外科	50	324	10.0	15.0
3	宋斌	中山大学附属第二医院关节外科	41	208	9.0	12.0
4	宋洋	中山大学附属第二医院关节外科	16	79	5.0	7.0
5	李卫平	中山大学附属第二医院关节外科	66	334	10.0	15.0