快速小量提取小麦叶片DNA的一种简易方法

• 作者: 姬虎太 张定一 王敏 那冬晨
• 来源期刊: 农业科学与技术（英文版）
• 学科: 农学
• 关键词: 小麦 DNA提取 简便快速
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 34-35,75
• 页数: 3页
• 分类号: S5
• 字数: 699字
• 语种: 英文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-4229-B.2009.05.011

摘要

[目的] 寻求少量、快速提取小麦幼叶DNA的方法.[方法] 以小麦幼叶(只要是健康的绿叶,老叶也可)为试验材料,用改良的CTAB法小量快速提取转基因小麦总DNA.具体步骤为:①直接用已灭菌的1.5 ml离心管夹取小麦叶片(无需称量),然后在液氮中快速冷冻后用玻璃棒研磨成细粉(研磨直接在离心管中进行,不必先在研钵中研磨然后再转移到离心管里,能够有效减少材料损失),加入600 μl预热(65 ℃)的2%CTAB提取缓冲液,快速振荡摇匀.置于65 ℃的水浴锅中温育30 min,期间温和混匀几次.②取出离心管,冷却至室温,加入600 μl氯仿∶异戊醇(24∶1)充分混匀,于4 ℃下12 000 r/min离心8 min(只抽提1次).③取上清,加入等体积预冷的异丙醇,缓慢混匀,至有絮状DNA析出,-20 ℃放置30 min以上.④ 4 ℃下12 000 r/min离心8 min.弃上清液,将沉淀用700 μl 70%乙醇清洗2次,离心,弃乙醇,室温下挥发乙醇,加入适量ddH2O或0.1×TE溶解沉淀(DNA),-20 ℃保存.所提取的DNA以0.8%琼脂糖凝胶电泳检测.[结果] 改良的CTAB法提取小麦基因组DNA所提取的DNA纯度高、无降解现象,适用于进行常规PCR扩增,并且需要材料量少、成本低,还可缩短操作周期、节省时间.[结论] 该研究为小麦DNA的提取提供了一种所需材料量少、简便、快速的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张定一	山西省农业科学院小麦研究所	130	1637	23.0	36.0
2	那冬晨	山西师范大学生命科学院	27	97	6.0	9.0
3	姬虎太	山西省农业科学院小麦研究所	54	335	10.0	17.0
4	王敏	山西省农业科学院小麦研究所	50	147	7.0	10.0