临床等级质粒DNA的实验室制备

• 作者: 刘守仁 宋志强 皮文辉
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 医学
• 关键词: 临床等级质粒DNA 色谱制备 质量控制
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 135-138,126
• 页数: 5页
• 分类号: R4
• 字数: 3804字
• 语种: 中文

摘要

在实验室有效获得100 mg临床试验等级的质粒DNA.摇床发酵3个批次,每批次4 L培养液,产生大约160 g的细菌沉淀物.碱裂解菌体,气浮法结合离心分离浮杂沉淀.裂解液经0.45/0.22 μm囊式过滤器过滤.然后采用阴离子色谱介质富集质粒,异丙醇沉淀.重新溶解沉淀后采用100 kD切向流超滤处理,获得100 mg临床试验等级质粒DNA.体外、体内转染试验对质粒表达效果进行了鉴定.结果表明,纯化的质粒DNA几乎检测不到内毒素、RNA和蛋白质,A260/A280比值在1.82～1.86范围内.纯化的质粒DNA能够满足动物临床试验.