新疆细毛羊抑制素α亚基cDNA的克隆、序列分析与表达

• 作者: 吴志焕 张成云 曾宪垠
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 新疆细毛羊 抑制素α亚基 基因克隆 表达
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 遗传教育
• 页码范围: 15-19
• 页数: 5页
• 分类号: S826.8+1.2
• 字数: 4176字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2009.01.003

摘要

根据GenBank上登录的绵羊抑制素α亚摹摹因序列,设计合成2对引物,以新疆细毛羊卵巢提取的总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增获得了约812 bp片段,经pMDl8-T载体克隆和测序分析证实为新疆细毛羊抑制素α亚基前体基因.进一步通过PCR反应扩增新疆细毛羊INHa亚基基因片段,经过NcoⅠ和HindⅢ双酶切后定向克隆于pET32a原核表达载体,获得pET-INH重组表达载体.将携带有重组表达载体的大肠杆菌BL21(DE3)通过1 mmol·L-1IPTG进行诱导表达,经过SDS-PAGE电泳检测,显示诱导表达蛋白大约为32 ku,与预期表达蛋白大小一致.Western blot检测表明重组原核表达载体在大肠杆菌中成功表达出了目的融合蛋白.新疆细毛羊抑制素α亚基基因的克隆、表达为进一步研究其功能和应用奠定了基础.