非结构蛋白1抗原捕获酶联免疫吸附法评价登革病毒抗体中和活性

• 作者: 丁彦青 丘立文 岳彩峰 温坤 潘玉先 狄飚 蔡建飘 车小燕
• 来源期刊: 中华预防医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 登革热病毒 病毒包膜蛋白质类 酶联免疫吸附测定 病毒非结构蛋白质类 中和试验
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 680-685
• 页数: 6页
• 分类号: R9
• 字数: 6608字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2009.08.009

摘要

目的 在获得具有中和活性的针对Ⅰ型登革病毒(dengue virus serotype Ⅰ,DENV-1)的抗体基础上,评价已建立的非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NSI)抗原捕获酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析抗体中和活性的可行性,为中和抗体的筛选和疫苗效果的评价提供一个更为快速、简便的检测方法.方法 使用重组DENV-1包膜蛋白Ⅲ区(envelopeprotein domainⅢ,EDⅢ)免疫5只BALB/c小鼠制备单克隆抗体(简称单抗),采用间接ELISA、间接免疫荧光法(immunofluorescenee assay,IFA)和免疫印迹法(Western Blot)对单抗进行筛选及鉴定;同时用该重组蛋白免疫1只新西兰兔,制备多克隆抗体血清;以传统噬斑减少中和试验(plaquereduction neutralization test,PRNT)作为参比方法,采用NSI抗原捕获ELISA对所获抗体进行中和活性检测.结果 获得4株针对DENV-1 EDⅢ单抗和1份兔多抗血清,且被PRNT试验证明均具有中和活性,四株单抗腹水(1A1、1B3、3D3、9D6)和兔多抗血清中和效价分别为1:1024、1:512、1:256、1:4096和1:4096.使用NS1抗原捕获ELISA法检测不到PRNT中和效价最低的3D3抗体对DENV-1有中和能力,而检测其余3株单抗(1A1、1B3、9D6)和多抗兔血清中和效价均远低于PRNT测定结果,分别为1:32、1:32、1:128和1:128.结论 简单、快速的NS1抗原捕获ELISA可用于评价DENV抗体的中和活性,该方法适合于高效价中和抗体的筛选,有望成为评价疫苗效果的方法之一.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	丁彦青	南方医科大学南方医院病理科	186	944	14.0	19.0
2	丘立文	南方医科大学珠江医院临床免疫研究所	23	101	6.0	7.0
3	温坤	南方医科大学珠江医院临床免疫研究所	8	37	4.0	6.0
4	车小燕	南方医科大学珠江医院临床免疫研究所	49	197	8.0	9.0
5	潘玉先	南方医科大学珠江医院临床免疫研究所	12	36	4.0	5.0
6	狄飚		70	659	13.0	22.0
7	蔡建飘	南方医科大学珠江医院临床免疫研究所	4	22	3.0	4.0
8	岳彩峰	南方医科大学珠江医院临床免疫研究所	1	5	1.0	1.0