正交设计优化大豆SSR-PCR反应体系及引物筛选

• 作者: 宋书宏 李志刚 苏辉
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 大豆 SSR-PCR 正交设计 体系优化 引物筛选
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 页码范围: 99-102
• 页数: 4页
• 分类号: S565.1
• 字数: 2917字
• 语种: 中文

摘要

以大豆(Glycine max L.)为材料,研究了PCR反应体系的主要成分对大豆SSR扩增结果的影响,并确定影响SSR扩增结果的各因素的最佳用量.以CTAB法提取的大豆叶片DNA为模板,应用L16(44)正交设计对影响大豆SSR-PCR的主要参数进行优化,建立适合大豆SSR-PCR反应的最佳体系.结果表明:各因素不同水平浓度对PCR反应结果均有显著影响.大豆SSR-PCR优化反应体系为:2.0 μL 10×PCR Buffer,30 ng模板DNA,150μmol/L dNTP,0.4 μmol/LSSR引物,1.5 U Taq DNA聚合酶,2.0 mmoL/L Mg2+,加ddH2O至终体积20.0μL.优化的PCR扩增程序为:94℃预变性5 min.94℃变性30 s,50℃退火1 min,72℃延伸1 min,共35个循环,72℃延伸5 min,4℃保存.同时选用200对大豆引物对2份材料进行扩增,筛选出条带清晰,多态性好的引物74对,用于大豆SSR标记的进一步研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋书宏		102	866	18.0	24.0
2	李志刚	内蒙古民族大学农学院	67	647	13.0	22.0
3	苏辉	内蒙古民族大学农学院	6	78	5.0	6.0