不吸水链霉菌基因文库的构建及初步筛选

• 作者: 关艳丽 吴红艳 桓明辉 王志 程永涛 陈飞
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 不吸水链霉菌 基因文库 地高辛探针标记 Southem杂交 菌落原位杂交
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 134-137
• 页数: 4页
• 分类号: Q93
• 字数: 3082字
• 语种: 中文

摘要

采用碱裂解法从不吸水链霉菌提取染色体DNA,用Sau3AI对染色体DNA进行部分水解,利用透析袋法回收3.5～9 kb之间的DNA片段.以pUC18为载体,用BamHI对其进行酶切,再用热敏磷酸酶去磷酸化,酶切产物与外源DNA按一定比例混合后,加入T4 DNA连接酶进行连接.连接产物用受体菌Ecoil DH5α进行转化,根据α-互补性质产生的颜色反应,挑选白色菌落,构建了相应的不吸水链霉菌基因文库.分别利用特异性探针2-1-1及1-2-1对不吸水链霉菌基因文库进行筛选,利用DIG-Ⅱ-dUTP对特异性探针进行标记,与基因文库中的阳性转化子进行Southern杂交,通过显色反应对杂交结果进行检测,由于时间关系,暂未筛选出阳性克隆,但这些工作对以后的相关实验研究具有很好的借鉴作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴红艳		35	155	8.0	10.0
2	陈飞		37	213	9.0	12.0
3	关艳丽		32	90	6.0	7.0
4	桓明辉		32	149	8.0	10.0
5	王志		27	120	8.0	10.0
6	程永涛		5	31	2.0	5.0