2种Heymann肾炎受体相关蛋白融合蛋白的制备及其意义

• 作者: 张伟兰 施岚 施辉 范亚平 达展云 陈晓岚
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 肾小球肾炎 基因表达 遗传载体 重组融合蛋白质类
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 665-668,后插3
• 页数: 5页
• 分类号: R6
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2009.08.013

摘要

目的:构建Heymann肾炎致病原受体相关蛋白(RAP)全长和羧基端多肽的原核融合表达载体,表达并纯化相应的融合蛋白.方法:通过RT-PCR法获得RAP全长的cDNA,将其与pGEM-T克隆载体连接并转化,对阳性克隆进行测序分析,设计针对RAP全长和羧基端带有EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切位点的特异引物,通过PCR合成RAP全长359个氨基酸和羧基端108个氨基酸的DNA.纯化后与含有GST的pGEX-4T-1载体体外重组连接,亚克隆到感受态细胞BL21中,经IPTG诱导,表达的融合蛋白通过GST-Sepharose 4B亲和层析法纯化,并经SDS-PAGE和Western Blot检测.结果:酶切分析、PCR及DNA序列测定结果表明成功构建了重组原核表达载体pGEX-4T-1-RAP1083和pGEX-4T-1-RAP324,含有重组质粒的大肠杆菌BL21经诱导后表达出RAP全长70 ku和羧基端40 ku的融合蛋白.Western Blot结果显示分别在分子质量70ku、40ku处出现特异性条带,与理论相符.结论:成功构建了RAP1083、RAP324与pGEX-4T-1融合基因表达载体,融合蛋白在大肠杆菌中高效表达,为后续研究Heymann肾炎的分子发病机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈晓岚	南通大学附属医院肾内科	63	181	6.0	9.0
2	范亚平	南通大学附属医院肾内科	125	491	12.0	14.0
3	达展云	南通大学附属医院肾内科	54	278	10.0	13.0
4	施辉	南通大学附属医院肾内科	52	141	5.0	8.0
5	施岚	南通大学附属医院肾内科	29	109	5.0	8.0
6	张伟兰	南通大学附属医院肾内科	1	1	1.0	1.0