人脆性组氨酸三联体(FHIT)基因的克隆及在HeLa细胞中表达的研究

• 作者: 刘慧 刘明秋 扈廷茂 梁浩
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: FHIT 过表达 HeLa细胞 凋亡
• 年，卷（期）: 2009,（15）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2808-2813,2860
• 分类号: Q31|Q75|R730.231
• 语种: 中文

摘要

目的:构建人脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad gene,fhit)基因与报告基因egfp的双顺反子表达载体及融合表达载体,研究fhit基因过表达对HeLa细胞生长及凋亡的影响.方法:根据已知fhit基因的mRNA序列,RT-PCR得到493bp的cDNA序列,将其构建到pMD18-T中,筛选目的片段插入正确的重组质粒,经限制性内切酶切割,回收目的片段分别插入双顺反子表达载体pIRES2-EGFP和融合表达载体pEGFP-C1的多克隆位点中.再以脂质体介导转染HeLa细胞,G418筛选稳定转染的克隆,分别通过基因组PCR、RT-PCR、免疫细胞化学及TUNEL法在DNA、RNA和蛋白质水平检测其表达情况.结果:转基因细胞基因组PCR获得493bp片段.证明目的基因已整合到细胞基因组中;RT-PCR检测其在RNA水平得到表达;免疫细胞化学及TUNEL法分析表明fhit基因在HeLa细胞内实现了稳定遗传与表达.结论:实验证明fhit基因过表达可有效促进HeLa细胞的凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	扈廷茂	内蒙古大学生命科学学院	49	330	10.0	16.0
2	梁浩	内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室	9	14	2.0	3.0
3	刘慧	内蒙古大学生命科学学院	3	1	1.0	1.0
7	刘明秋	内蒙古大学生命科学学院	11	47	5.0	6.0