人补体受体1型活性片段SCR15-18在毕赤酵母中的表达、纯化及活性鉴定

• 作者: 何莉 刘高科 杨永涛 汪正清
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 补体受体1型 毕赤酵母 分泌表达 补体溶血
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 470-473
• 页数: 4页
• 分类号: R392-33|R392.11|R392.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2009.06.002

摘要

目的 实现人补体受体1型(complement receptor type 1,CR1)活性片段SCR15-18在毕赤酵母中的分泌表达.方法 用PCR从原核表达质粒pET32a-sCR1-SCR15-18上扩增CR1-SCR15-18的编码基因,并克隆到毕赤酵母分泌表达质粒pPIC9,构建重组质粒pPIC9-CR1-SCR15-18,鉴定后测序;重组质粒电转化整合到毕赤酵母GS115基因组中,菌落PCR技术筛选阳性转化株;经摇瓶发酵和甲醇诱导,SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白的表达;Ni2*-NTA agarose亲和层析纯化目的蛋白,并用体外抑制补体溶血反应实验测定目的蛋白的生物活性.结果 成功构建重组表达质粒pPIC9-CR1-SCR15-18;SDS-PAGE和Western blot证实目的基因在毕赤酵母中成功分泌表达;表达产物经镍柱快速纯化后,能够明显抑制补体的体外溶血.结论 在毕赤酵母中成功实现了CR1-SCR15-18蛋白的分泌表达,该蛋白具有较高的抑制补体溶血的生物活性.