干扰COX-2基因表达对人肺腺癌A2细胞体外恶性增殖的影响

• 作者: 张春彦 李伟英 杨学惠 汪惠 赖百塘
• 来源期刊: 中国肺癌杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Cyclooxygenase-2 RNA干扰 体外 肺肿瘤
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 100-105
• 页数: 6页
• 分类号: R734.2
• 字数: 5513字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3779/j.issn.1009-3419.2009.02.02

摘要

背景与目的 COX-2在多种肿瘤组织中高表达,参与了肿瘤的发生发展,RNA干扰(RNAi)技术是一种经济、快捷、高效的抑制特异基因表达的技术手段.本研究应用RNAi技术研究干扰COX-2基因表达的抑制效果及抑制COX-2基因表达对A2细胞体外恶性增殖的影响.方法 以COX-2为靶点,构建3个带有人U6启动子的COX-2小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)表达载体.用脂质体lipofectamine介导,分别将3个siRNA表达载体及空载体转染到COX-2表达阳性的A2细胞,建立转染细胞株.采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测COX-2表达水平的变化.通过细胞生长曲线、集落形成试验研究干扰COX-2基因表达对A2细胞体外增殖的影响.结果 经过PCR扩增、内切酶鉴定、DNA测序和BLAST比对证实3个siRNA和U6启动子序列正确并准确克隆到pEGFP载体.转染细胞株分别命名为A2-3、A2-7、A2-10和A2-P.转染后24 h、48 h、72 h,A2-P细胞均有绿色荧光表达,而A2-3、A2-7、A2-10细胞均未观察到绿色荧光.RT-PCR和Western blot结果显示,3个siRNA表达载体均发挥作用,COX-2表达受到抑制.与A2细胞比较,A2-3、A2-7、A2-10细胞的COX-2 mRNA表达量分别降低15.6%、20.4%和64.2%,COX-2蛋白表达量分别降低23.7%、36.7%和60.2%.细胞生长曲线、集落形成试验的结果显示,A2-10细胞生长减慢,集落形成率减少,而A2-3和A2-7细胞生长没有明显的改变.结论 应用RNAi技术熄灭COX-2基因表达对A2细胞的体外恶性增殖有明显的抑制作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赖百塘		5	12	2.0	3.0
2	李伟英		1	2	1.0	1.0
3	汪惠		1	2	1.0	1.0
4	杨学惠		1	2	1.0	1.0
5	张春彦		1	2	1.0	1.0