痘苗病毒辅助的重组丙型肝炎病毒生产体系中生产细胞的选择

• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 重组丙型肝炎病毒 痘苗病毒 荧光定量聚合酶链式反应
• 年，卷（期）: 2009,（28）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2877-2880
• 页数: 4页
• 分类号: R5
• 字数: 4112字
• 语种: 中文

摘要

目的:探讨痘苗病毒辅助的重组丙型肝炎病毒制备体系中生产细胞的选择.方法:将已构建好的质粒pT7HCV及pVHCV分别共转染BHK21,HepG2,SMMC7721细胞株,4 h后用痘苗病毒感染细胞,96 h后用RT-PCR检测HCV的RNA表达.用荧光定量PCR方法检测培养上清中RNA的拷贝数,并用Western blot检测结构蛋白E2以及非结构蛋白NS5的表达.结果:PT-PCR检测到各细胞株培养上清中均有HCV的RNA的存在,定量PCR显示RNA的拷贝数在BHK21,HepG2,SMMC7721细胞中的产量分别为(2.974±0.8)×107,(1.99±0.17)×105,(1.19±0.17)×105(copies/mL).Western blot检测到在这3种生产细胞中均有HCV非结构蛋白NS5的表达.结论:BHK21,HepG2,SMMC7721细胞株均可生产出重组丙型肝炎病毒颗粒,且以BHK21为生产细胞株时产量最高.