简便高效的原代HUVECs培养

• 作者: 杨洪艳 董子明 赵军 赵明耀 路静 郑智敏 黄幼田
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: 脐静脉 内皮细胞 细胞冻存 组织工程
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 78-81
• 页数: 4页
• 分类号: R322.12
• 字数: 2354字
• 语种: 中文

摘要

目的 建立简便高效的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)体外分离、培养、冻存方法 ,以获得大量HUVECs为相关医学基础研究及组织工程学提供良好细胞来源.方法 新鲜脐静脉内灌注0.25%胰蛋白酶消化,获得HUVECs,内皮细胞培养基(ECM)进行培养.倒置显微镜观察细胞形态,免疫细胞化学、RT-PCR检测VWF、CD144的表达.HUVECs加入10%甘油的冻存液,置于液氮保存4周,冻存复苏后Western blot检测VWF、CD144蛋白水平的表达.结果 HUVECs体外生长2～3 d可铺满单层,细胞呈梭形,漩涡状排列牛长,传代后可见管腔样结构;高表达VWF和CD144;冻存后复苏的细胞分裂增殖旺盛,蛋白水平高表达VWF、CD144.结论 脐静脉灌注胰蛋白酶消化法配合ECM培养可获取大量高纯度的内皮细胞,可作为相关研究良好的细胞来源.