Ad-hBNP重组腺病毒的构建

• 作者: 宋衍秋 崔让庄 毛用敏 赵莉莉
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 脑钠肽 腺病毒载体 同源重组 基因治疗
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 863-867
• 页数: 5页
• 分类号: Q78541.61
• 语种: 中文

摘要

目的:构建携带人BNP cDNA片段高效重组腺病毒Ad-hBNP,为实验提供研究工具.方法:从人心肌组织提取的RNA,用RT-PCR方法中获得hBNP扩增片段,与pUCm-T载体连接构成pUC-hBNP重组质粒;用KpnI、SalI分别双酶切pUC-hBNP和pAd-Track-CMV,将目的片段插入pAd-Track-CMV构建重组质粒pAdTrack-CMV-hBNP;pAdTrack-CMV-hBNP重组质粒经Pmcl酶切线性化后,电转法转入含有腺病毒骨架质粒的E.coli BJ5183感受态细胞中,同源重组获得重组质粒pAdEasy-hBNP;经BamHI、PacI酶切鉴定及基因序列检测后,重组成功的pAdEasy-hBNP经阳离子脂质体法转染HEK293T细胞,经过包装、扩增和纯化后,测定病毒滴度,电镜检测病毒形态.结果:转染HEK293T细胞5-6天GFP呈"彗星"状;重组腺病毒滴度为1.1×1012V.P/ml;电镜检测重组腺病毒为多面体结构.结论:应用Ad-Easy缺陷性腺病毒载体系统成功构建重组腺病毒Ad-hBNP,为进一步基因治疗研究提供分子生物学工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	毛用敏		61	252	9.0	12.0
2	崔让庄		53	208	7.0	11.0
3	赵莉莉		18	37	4.0	4.0
4	宋衍秋		3	5	1.0	2.0