针对核因子-kB P65基因的短发夹干扰RNA逆转录病毒载体构建与鉴定

• 作者: 吴春婷 朱光发 赵佳晖 闫树凤 靳丽妍
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: RNA干扰 短发夹RNA 逆转录病毒 核因子-kB
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1462-1464,1483
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:构建针对人核因子kB亚基P65基因mRNA的短发夹干扰RNA(shRNA)逆转录病毒表达载体,并探讨小干扰RNA(siRNA)靶向抑制NF-kB P65基因表达的作用.方法:根据shRNA设计原则,在人NF-kB P65全长序列中选取合19个核苷酸靶序列,设计形成siRNA的DNA模板并克隆到shRNA表达载体pSUPER.retro.neo中,构建针对NF-kB P65基因的shRNA表达载体.经293A细胞包装,并感染NIH3T3细胞进行病毒滴度测定后,感染THP-1细胞.分别采用RT-PCR和Western blot从mRNA和蛋白水平检测干扰效果.结果:限制性酶切和基因测序证实针对人NF-kB P65亚基的shRNA表达逆转录病毒载体成功构建;其感染THP-1细胞后,NF-kB P65的mRNA和蛋白表达明显抑制.结论:成功构建了NF-kB P65 shRNA逆转录病毒表达载体,该载体能高效感染THP-1并明显抑制NF-kB P65的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱光发	首都医科大学附属北京安贞医院呼吸科	91	568	13.0	19.0
2	赵佳晖	首都医科大学附属北京安贞医院泌尿外科	33	68	5.0	6.0
3	靳丽妍	首都医科大学附属北京安贞医院呼吸科	7	71	3.0	7.0
4	吴春婷	首都医科大学附属北京安贞医院呼吸科	16	42	4.0	5.0
5	闫树凤	首都医科大学附属北京安贞医院呼吸科	8	30	3.0	5.0