I型单纯疱疹病毒胸苷激酶真核表达载体的构建及其表达鉴定

• 作者: 崔静 杨竹 樊萍 汤雄文 王露颖 甘胜伟 胡接力
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 医学
• 关键词: 自杀基因 胸苷激酶/丙氧鸟苷 真核表达载体 旁观者效应 卵巢癌
• 年，卷（期）: 2009,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 122-127
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 5052字
• 语种: 中文

摘要

为构建单纯疱疹病毒I型胸苷激酶(HSV1TK)的真核表达载体pcDNA3.1-EGFP/HSV1TK,鉴定其在真核细胞中的表达和功能.以pORF-HSV1TK为模板,PCR扩增的目的基因HSV1TK片段与pMD18-T载体相连接构建重组克隆pMD18-T/HSV1TK.再双酶切出HSV1TK片段,插入pcDNA3.1-EGFP多克隆位点,构建pcDNA3.1-EGFP/ HSV1TK真核表达载体并进行酶切、测序鉴定[1].分别用荧光显微镜观察和RT-PCR方法检测脂质体介导pcDNA3.1-EGFP/ HSV1TK在卵巢癌细胞SKOV3的表达;分别用MTT法和光镜检测胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSV1TK/GCV)系统对SKOV3体外杀伤作用及旁观者效应.结果表明,重组载体酶切鉴定结果与预期结果一致,基因序列与GenBank上报道的HSV1TK基因序列完全一致.荧光显微镜观察转染后的细胞发出绿色荧光;RT-PCR结果表明HSV1TK基因能在SKOV3内有效表达.MTT和光镜结果显示转染HSV1TK基因的SKOV3细胞,加入前体药物丙氧鸟苷(GCV)处理后对其有明显的杀伤作用和旁观者效应.成功构建的真核表达载体pcDNA3.1-EGFP/ HSV1TK能在SKOV3细胞中稳定表达,且HSV1TK对卵巢癌细胞株SKOV3体外有强大的杀伤作用和旁观者效应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨竹	重庆医科大学附属第二医院妇产科	98	654	12.0	21.0
2	崔静	重庆医科大学感染性疾病重点实验室	5	12	2.0	3.0
3	胡接力	重庆医科大学感染性疾病重点实验室	18	12	2.0	2.0
4	甘胜伟	重庆医科大学解剖教研室	26	82	6.0	8.0
5	汤雄文	重庆医科大学附属第二医院妇产科	4	7	2.0	2.0
6	樊萍	重庆医科大学附属第二医院妇产科	3	11	2.0	3.0
7	王露颖	重庆医科大学附属第二医院妇产科	3	14	2.0	3.0