靶向存活素基因的RNAi联合X线照射对肺腺癌A549细胞凋亡的影响

• 作者: 张斌 李长锋 杨海山 王芳
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 存活素 流式细胞术 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 68-72
• 页数: 5页
• 分类号: R734.2
• 语种: 中文

摘要

目的:构建靶向存活素(survivin)基因的RNA干扰(RNAi)载体,观察其联合X射线照射对肺腺癌A549细胞凋亡的影响.方法:根据GenBank中survivin的cDNA序列设计干扰序列,构建重组干扰质粒pGenesil2-survivin.酶切、测序鉴定正确后,干扰质粒经脂质体介导转染肺腺癌A549细胞;实验设正常组、空载体组、pGenesil2-survivin组、5 Gy照射组和pGenesil2-survivin+5 Gy照射组.流式细胞术与TUNEL检测细胞凋亡的变化,Western blotting检测survivin及caspase-3蛋白表达.结果:KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切,得到大小为389 bp和4 206 bp的两个片段,与预期结果一致;测序结果与寡核苷酸链经DNAssist2.0软件进行比对,二者完全一致,说明载体构建正确;质粒pGenesil2-survivin转染肺腺癌A549细胞48 h,pGenesil2-survivin与5 Gy X射线照射都能诱导细胞凋亡百分率增加(P＜0.05),二者共同作用凋亡百分率增加更明显;Western blotting结果显示,pGenesil2-survivin组中survivin蛋白与β-actin蛋白灰度比值较正常组明显降低(P＜0.01);而caspase-3蛋白与β-actin蛋白灰度比值较正常组明显增强,且pGenesil2-survivin+5 Gy照射组增加更明显(P＜0.01).结论:靶向存活素基因的RNAi能够明显抑制survivin蛋白表达,增强caspase-3蛋白表达,促进凋亡;联合5 Gy X射线照射,增强促凋亡作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张斌	吉林大学中日联谊医院内镜科	113	706	14.0	21.0
2	杨海山	吉林大学中日联谊医院放射线科	131	605	13.0	18.0
3	王芳	吉林大学中日联谊医院内镜科	108	583	11.0	21.0
4	李长锋	吉林大学中日联谊医院内镜科	65	399	11.0	16.0