携带人miR302和EGFP基因慢病毒表达载体构建

• 作者: 姚开泰 姚志芳 申红芬 肖东 肖高芳 贾俊双
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: miR302 EGFP 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2009,（9）
• 所属期刊栏目: 实验研究论著
• 页码范围: 977-979,封4
• 分类号: R34|R739.63
• 语种: 中文

摘要

目的 构建携带人miR302和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒表达载体pFUM3GW.方法 Nhe Ⅰ和Not Ⅰ双酶切pmiR302ApE以释放miR302,接着补平酶切位点而获连接用miR302:BamH Ⅰ酶切携带EGFP的慢病毒载体pFUGW,接着补平酶切产物.并去磷酸化而获连接用载体片段,最后使用DNA连接试剂盒(TaKaRa)中的Solution Ⅰ将其与连接用miR302连接,连接产物转化,次日挑选单菌落,PCR筛选正向阳性克隆,随后将选定的含有阳性克隆的单菌落摇菌,提取质粒并行酶切鉴定及对插入的miR302测序.所构建载体命名为pFUM3GW.获pFUM3GW后,按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒包装和确认慢病毒是否成功生产;携带miR302和EGFP基因的慢病毒感染鼻咽癌细胞株C666-1、CNE1和5-8F以建立相应病毒感染体系.结果 PCR、酶切和测序证实成功构建了pFUM3GW,按标准程序生产的携带miR302和EGFP基冈的慢病毒上清高效率感染小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)及鼻咽癌细胞株C666-1、CNE1和5-8F.结论 成功构建携带人miR302和EGFP基因的慢病毒表达载体pFUM3GW,为相关后续研究打下了良好基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚开泰	中南大学肿瘤研究所	32	173	7.0	12.0
5	贾俊双	南方医科大学肿瘤研究所	15	87	4.0	9.0
6	肖东	南方医科大学肿瘤研究所	29	117	5.0	10.0
10	肖高芳	南方医科大学肿瘤研究所	6	49	2.0	6.0
11	申红芬	中南大学肿瘤研究所	4	46	2.0	4.0
13	姚志芳	南方医科大学肿瘤研究所	5	48	2.0	5.0