小鼠内皮祖细胞的培养和移植

• 作者: 曹君 杨悦 陈平
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 内皮祖细胞 小鼠 骨髓
• 年，卷（期）: 2009,（41）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 8109-8113
• 页数: 5页
• 分类号: R318
• 字数: 5388字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.41.022

摘要

背景:内皮祖细胞移植在缺血性心脑血管疾病、创伤愈合等血管类疾病的治疗中展现出广泛的应用前景,目前内皮祖细胞在肺部疾病的研究还比较少.目的:分离和诱导培养骨髓来源的内皮祖细胞,并进行鉴定;经气管移植,观察内皮祖细胞的定位.设计、时间及地点:细胞体外培养和体内移植实验,于2008-05/2009-04在中南大学湘雅二医院中心实验室完成.材料:6周龄C57BL/6J小鼠17只,随机数字表法分为5只供体,10只受体,2只供细胞双荧光染色、免疫细胞化学实验.方法:冲洗小鼠长骨骨髓,用密度梯度离心法收集单个核细胞层,内皮细胞培养液EGM-2MV培养,观察细胞形态,将培养第7天内皮祖细胞与Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白37℃孵育4 h,以检测内皮祖细胞对Dil-乙酰化低密度脂蛋白的摄取,再用20 g/L多聚甲醛固定细胞10 min,固定后用PBS浸洗,将FITC标记的凝集素Ⅰ加入上述标本,37℃孵育1 h,PBS浸洗,通过激光共聚焦显微镜鉴定FITC-凝集素Ⅰ和Dil-乙酰化低密度脂蛋白.主要观察指标:将标记CM-Dil的内皮祖细胞经气管注入小鼠体内,10 d后观察其在体内的定位.免疫组织化学方法检测细胞血管性血友病因子阳性率.移植后内皮祖细胞在体内的定位.结果:贴壁细胞呈现类圆形、纺锤形或多边形,7～14 d可见部分贴壁细胞生长呈"铺路石"样外观.胞浆摄取Dil-乙酰化低密度脂蛋白,显示红色,胞膜结合FITC-凝集素Ⅰ,显示绿色,双染色阳性细胞为黄色,为正在分化的内皮祖细胞,双阳性细胞达90%以上,血管性血友病因子阳性率90%以上.经气管移植后标记CM-Dil的内皮祖细胞可定位至肺内气管、血管及肾、脾血管.结论:用密度梯度离心法在EGM-2MV培养体系下可以获得较高纯度的内皮祖细胞,该细胞气管移植后可定位至肺内气管、血管及肾、脾血管.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈平	中南大学湘雅二医院呼吸科	259	2113	23.0	32.0
2	曹君	中南大学湘雅二医院呼吸科	9	72	4.0	8.0
3	杨悦	中南大学湘雅二医院呼吸科	14	119	5.0	10.0