白细胞介素3基因cDNA克隆与转导及其在脐血CD34+细胞中的表达

• 作者: 周晓春 徐大为 王庆林 许倩 贾春燕 赵秀荣
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素3 克隆 转导 CD34+细胞
• 年，卷（期）: 2009,（36）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 7175-7178
• 页数: 4页
• 分类号: R394.2
• 字数: 896字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.36.036

摘要

背景:单份脐血难以满足成人造血干细胞移植的要求,需对其进行体外扩增,这不仅需要较长的时间和较高的培养条件,而且容易导致干细胞自身分化,从而影响移植效果.目的:克隆人白细胞介素3基因cDNA,构建其真核表达载体并转导脐血CD34+细胞,观察白细胞介素3的表达情况.设计、时间及地点:细胞一基因组学体外实验,于2008年在承德医学院完成.材料:健康成人外周血由承德市中心血站提供,脐血由承德市妇幼保健院提供,提供者对实验均知情同意.方法:采集健康成人外周血,应用Ficoll密度梯度法分离单个核细胞,免疫磁珠法分离脐血CD34+细胞.提取白细胞介素3 mRNA,应用RT-PCT扩增白细胞介素3 cDNA,构建真核表达载体pcDNA3/IL-3.设立2组:实验组利用基因枪技术将pcDNA3/IL-3导入脐血CD34+细胞中,对照组未行转染.主要观察指标:采用人白细胞介素3 ELISA试剂盒检测脐血CD34+细胞上清液中白细胞介素3水平.结果:扩增的白细胞介素3基因cDNA理论上应为616 bp,实际PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后,紫外线下可见预期大小的条带,反转录合成的cDNA完整.BamH Ⅰ和XbaⅠ双酶切后,电泳可见616 bp的插入片段,与白细胞介素3基因序列相同.转染第1～7天,实验组脐血CD34+细胞上清液中白细胞介素3水平明显高于未转染对照组(t=3.46,P<0.05).结论:白细胞介素3基因cDNA克隆成功,并成功构建了真核表达质粒pcDNA3/IL-3,pcDNA3/IL-3能在脐血CD34+细胞中短期有效表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周晓春		30	186	7.0	12.0
2	赵秀荣		37	146	6.0	9.0
3	徐大为		22	48	5.0	5.0
4	许倩		101	324	10.0	13.0
5	王庆林		30	117	6.0	9.0
6	贾春燕		1	0	0.0	0.0