嗜酸氧化亚铁硫杆菌硫氰酸酶的表达、纯化及其性质鉴定

• 作者: 吴安娜 戴云杰 柳建设 谭建锡 郑春丽 金德才
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 嗜酸氧化亚铁硫杆菌 硫氰酸酶 铁硫簇 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2009,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2005-2007,2004
• 页数: 4页
• 分类号: Q939.99
• 语种: 中文

摘要

目的:嗜酸氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)硫氰酸酶是硫代谢中极其重要的酶,其作用主要包括氰化物的解毒,铁-硫蛋白的合成,以及硫胺、硫尿苷或烟碱乙酸胆碱的生物合成,硫氰酸酶的研究对揭示生物冶金机理具有重要的推动作用.方法:以A.ferrooxidans ATCC23270基因组为模板设计引物,通过PCR扩增得到编码硫氰酸酶的基因,目的基因片段与原核表达载体PLM1构建重组体,然后转入大肠杆菌(Eschcrichia coli,E.coli)DH5a感受态中,基因测序正确后,重组质粒再转入E.coli BL21感受态中,加IPTG诱导蛋白表达,用一步亲和层析法纯化出浓度和纯度都较高的硫氰酸酶.结果:SDS-PAGE分析证实蛋白分子量为21kD,紫外可见光分析,确定硫氰酸酶中含有铁硫簇,酶活测定发现重组硫氰酸酶在体外不具有酶活性,可能与酶反应条件及信号肽的切断有关.结论:体外成功克隆.表达,纯化出重组体硫氰酸酶,其基本性质也得到阐述.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	柳建设	中南大学资源加工与生物工程学院	48	520	14.0	20.0
5	金德才	中南大学资源加工与生物工程学院	4	43	3.0	4.0
6	郑春丽	中南大学资源加工与生物工程学院	2	9	2.0	2.0
7	吴安娜	中南大学资源加工与生物工程学院	2	9	2.0	2.0
8	戴云杰	中南大学资源加工与生物工程学院	2	9	2.0	2.0
9	谭建锡	中南大学资源加工与生物工程学院	1	3	1.0	1.0