HIV-1 env蛋白的制备活性鉴定与快速检测方法的建立

• 作者: 刘彬 崔大祥 杜彤 杨浩 高峰 鲍晨晨
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: HIV-1 env基因 抗HIV-1 gp41抗体 艾滋病毒 量子点标记的荧光免疫分析 快速翻译系统 Western Blot分析
• 年，卷（期）: 2009,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1474-1478
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 4208字
• 语种: 中文

摘要

目的 制备具有生物活性的HIV-1 env蛋白,利用量子点的特殊光学性能结合免疫分析技术,建立快速、简便的免疫凝集分析检测HIV-1 gp41抗体方法.方法 以HIV-1 env基因质粒为模板,采用体外快速翻译系统(RTS)线性模板试剂盒制备线性模板,用RTS100试剂盒合成env蛋白,用磁珠法纯化蛋白,用Western Blot方法鉴定蛋白活性.纯化后的HIV-1 env蛋白采用量子点标记,与样品液中的抗HIV-1 gp41抗体进行免疫反应,根据量子点的荧光信号的变化,定量检测样品液中抗gp41抗体的浓度.结果 体外快速翻译系统表达出相对分子量约为97KD的env蛋白;Westem blotting证实纯化后的蛋白具有生物活性,量子点标记的env蛋白与山羊抗HIV-1 gp41抗体发生了免疫凝集反应.使量子点发生荧光淬灭,荧光信号强度与抗体浓度呈负相关.结论 HIV-1 env蛋白可采用RTS系统进行大量表达,分离纯化后的env蛋白具有生物学活性,建立的量子点标记的免疫凝集反应方法检测HIV gp41结果准确,方法简便.