摘要:
背景:脂肪干细胞在特定的培养条件下可向软骨细胞分化,软骨形态发生蛋白1是重要的调节软骨细胞分化的生长因子.前期实验已证实了软骨形态发生蛋白1诱导大鼠脂肪干细胞体外可向软骨细胞形态分化,但是能否在体内成软骨呢?目的:验证应用软骨形态发生蛋白1体外诱导SD仔鼠脂肪干细胞,复合自制牛松质骨支架材料植于裸鼠皮下成软骨情况.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-11/2008-05在解放军第四军医大学基础部实验动物中心、解放军第四军医大学西京医院全军骨科实验研究所完成.材料:7 d龄SD仔鼠16只用于分离培养脂肪下细胞及软骨细胞,20只成年裸小鼠用于进行体内埋植实验,雌雄不限.方法:体外培养的脂肪干细胞复合于支架上,加入诱导液(基础培养液+50 μg/L软骨形态发生蛋白1)继续培养2周作为实验组:将SD仔鼠软骨细胞复合于支架上,常规培养2周作为对照组.20只裸小鼠,左侧腋窝皮下均植入实验组细胞-支架复合物,右侧腋窝皮下均植入对照组细胞-支架复合物.8,12周各处死10只,行甲苯胺蓝和番红O-固绿染色.主要观察指标:①细胞形态变化及扫描电镜观察细胞-支架复合物.②四甲基偶氮唑盐法测定实验组和对照组细胞各代的增殖情况.③裸小鼠体内埋植实验结果.结果:扫描电镜示,软骨细胞和经软骨形态发生蛋白1诱导的脂肪干细胞在自制牛松质骨支架上均生长良好,平均孔径约为382 μ m.经软骨形态发生蛋白1诱导的第2,3,4,5,6代脂肪干细胞(诱导组)生长良好并保持持续增殖趋势;对照组的软骨细胞从第4代开始生长缓慢.裸小鼠体内埋植12周时,番红O-固绿染色:实验组阳性,细胞呈球形,可见软骨陷窝;对照组阴性,细胞呈梭形.但两组支架都已降解.结论:软骨形态发生蛋白1体外诱导SD仔鼠脂肪干细胞,复合自制牛松质骨支架,裸鼠体内可成软骨.