兔外周血间充质干细胞的体外分离培养及诱导成骨

• 作者: 刘萌萌 孙良 李中华 栾保华 王小霞
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 外周血间充质干细胞 培养基 α-MEM L-DMEM 成骨诱导
• 年，卷（期）: 2009,（27）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 5291-5295
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 5198字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.27.018

摘要

背景:研究证明外周血中存在间充质干细胞,但含量极少.目的:拟从兔外周血中提取间充质干细胞,并诱导其向成骨细胞分化.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-06/12在山东省立医院中心实验室完成.材料:新两兰大白兔6只,购自山东省农科院.α-MEM培养基、L-DMEM培养基为Hyclone公司产品.方法:每隔2 d从兔背部不同部位切去3 cm×3 cm的全层皮肤(保留背部肌层),所切皮肤做原何移植后包扎,每只兔连续创伤4次.分别于创伤前及末次创伤1周后从股静脉取外周血,采用密度梯度离心法获取间充质干细胞,设立2组,分别加入含体积分数为10%胎生血清的α-MEM培养基或L-DMEM培养基.细胞传至第2代以1×105cm2密度接种于12孔板,加入含成骨诱导剂的H-DMEM培养液进行成骨诱导.主要观察指标:创伤前后细胞形态观察,成纤维样细胞集落形成率,成骨诱导效果.结果:创伤前所获得的细胞首次换液后,未见有梭形细胞贴壁;创伤后所获得的细胞接种24 h即可见有短梭形及多角形细胞贴壁,五六天后出现细胞集落.与L-DMEM培养基组比较,α-MEM培养基组外周血成纤维样细胞集落形成率明显升高(P<0.05).外周血间充质干细胞成骨诱导后,呈梭形、三角形或多角形,有突起,可见两三个核仁和细胞分裂相,增殖速度缓慢,诱导7 d后碱性磷酸酶阳性率达80%以上,诱导21 d后茜素红染色形成钙结节.结论:皮肤损伤刺激后可成功从兔外周血中获取间充质干细胞,且具备成骨分化特性,α-MEM培养基较L-DMEM培养基更适合外周血间充质干细胞的体外生长.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	栾保华	山东大学附属省立医院烧伤整形外科	10	26	3.0	5.0
2	李中华	济南市第四人民医院烧伤科	8	50	5.0	7.0
3	刘萌萌	山东大学附属省立医院烧伤整形外科	9	51	4.0	7.0
4	孙良	山东大学附属省立医院烧伤整形外科	4	11	2.0	3.0
5	王小霞	山东大学附属省立医院烧伤整形外科	3	25	2.0	3.0