荧光活性染料Dil标记的大鼠骨髓基质干细胞生长增殖及其成骨分化

• 作者: 余元龙 吴涛 柳大烈 梁双武 赵培冉 黎洪棉
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓基质干细胞 Dil 标记 增殖 分化
• 年，卷（期）: 2009,（40）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 7854-7858
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 5574字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.40.010

摘要

背景:目前关于骨髓基质干细胞的标记报道较多,各有其优缺点,寻找一种有效、简便的细胞标记与示踪的方法尤为关键.目的:观察经荧光活性染料Dil标记的大鼠骨髓基质干细胞生长增殖与成骨分化情况.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-09/12在南方医科大学组织工程研究中心完成.材料:SD大鼠10只,由南方医科大学实验动物中心提供.Dil应用液为美国Molecular Probe Inc公司产品.方法:全骨髓法体外分离培养大鼠骨髓基质干细胞,取传至第3代细胞,加入无血清的DMEM制成细胞悬液,再加入1×109L-1的Dil应用液5 μL,37℃下孵育25 min,清洗离心后,加入DMEM高糖完全培养基,荧光显微镜观察细胞荧光强度及形态变化.另取传至第3代细胞,加入含地塞米松、维生素C、β-磷酸甘钠、体积分数为10%胎牛血清的成骨诱导剂进行诱导分化.主要观察指标:Dil标记后细胞形态变化,XTT比色法测定细胞增殖状况,细胞上清液中乳酸脱氢酶活性,成骨诱导后细胞碱性磷酸酶活性及成骨分化能力.结果:锥虫蓝染色见骨髓基质干细胞活力好,仅偶见蓝染细胞,荧光显微镜下Dil标记后全部细胞的胞浆、胞膜均显红色荧光,标记的骨髓基质干细胞呈梭形,胞浆丰富,保持了良好的正常形态,Dil标记阳性率为100%,标记早期细胞形态呈荧光环状,48 h后细胞中荧光颗粒增多,荧光增强,细胞核未染荧光.与未标记细胞比较,Dil标记的骨髓基质干细胞增殖吸光度、培养上清液乳酸脱氢酶活性、碱性磷酸酶活性均无明显变化(P>0.05).成骨诱导7 d后,钙钴法染色两组骨髓基质干细胞均见不同程度的胞质呈棕黑色改变.结论:Dil能有效标记体外培养的骨髓基质干细胞,并在细胞内稳定表达,且标记细胞形态良好,对活体细胞无毒性作用;此外,Dil标记不影响骨髓基质干细胞的生长、增殖及成骨分化能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	柳大烈	南方医科大学珠江医院整形外科	177	1288	16.0	25.0
2	吴涛	南方医科大学组织工程研究中心	46	491	12.0	20.0
3	余元龙	中山大学附属中山医院器官移植中心	18	95	5.0	9.0
4	赵培冉	南方医科大学组织工程研究中心	29	159	7.0	10.0
5	梁双武	南方医科大学组织工程研究中心	20	156	8.0	12.0