Fas相关死亡结构域蛋白荧光真核表达载体的构建及其鉴定

• 作者: 印安宁 张险峰 江应安
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Fas相关死亡结构域蛋白 真核表达 绿色荧光蛋白 稳定转染
• 年，卷（期）: 2009,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 981-984
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 4532字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2009.10.005

摘要

目的: 构建真核表达载体pEGFP-N1-FADD并检测其在结肠癌细胞株SW480中的表达.方法: 设计人FADD特异性引物, 从人结肠癌细胞SW480细胞提取总RNA, 通过RT-PCR方法获取人FADD全长cDNA, 定向克隆至真核表达载体pEGFP-N1. 应用PCR、酶切和DNA测序进行鉴定, 确认后转染人结肠癌细胞SW480.G418抗性筛选获得FADD稳定表达细胞克隆,应用Western blot检测FADD的表达水平.结果: 测序及酶切鉴定证明获得人全长FADD基因, FADD基因正确插入pEGFP-N1中, 在荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白在SW480细胞中的稳定表达, Western blot检测结果显示稳定转染pEGFP-N1-FADD的细胞FADD表达水平增高, 是未转染细胞的2.34倍.结论: 成功构建真核表达载体pEGF P-N1-FADD, 并且在SW480细胞中稳定表达.