肌球蛋白轻链激酶CaM结合位点突变体的构建

• 作者: 吕广艳 崔颖 张月 王辉 赵莹 高颖 魏晓晴
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 肌球蛋白轻链激酶 钙调蛋白 突变体
• 年，卷（期）: 2009,（17）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 3247-3250
• 页数: 4页
• 分类号: Q75|Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:平滑肌肌球蛋白轻链激酶(myosin light chainkinase,MLCK)具有激酶活性和非激酶活性,在平滑肌收缩过程中起着关键酶调控的作用.为探寻MLCK的非激酶活性区域对MLCK活性的影响,本实验利用分子生物学技术构建了肌球蛋白轻链激酶CaM结合位点突变体,并纯化出重组的MLCK表达的蛋白质,为深入研究MLCK的非激酶活性在调节平滑肌收缩过程中的分子机制提供了实验基础.方法:利用野生型MLCK全长的cDNA序列设计CaM结合位点的突变引物,利用PCR技术进行定点突变,获得CaM结合位点的突变体(△CaM/MLCK).在大肠杆茵中表达重组CaM结合位点的突变体(△CaM/MLCK),通过亲和层析及凝胶过滤进行分离纯化重组蛋白,SDS-PAGE检测表达及纯化的重组蛋白.结果:构建重组MLCK钙调蛋白结合位点突变体(△CaM/MLCK),△CaM/MLCK在大肠杆菌中以可溶形式大量表达并得到纯化.结论:成功构建重组MLCK钙调蛋白结合位点突变体(△CaM/MLCK)并获得纯化的表达蛋白质.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高颖		23	82	5.0	8.0
3	吕广艳		7	11	2.0	3.0
4	赵莹		9	18	3.0	4.0
7	魏晓晴		6	9	1.0	2.0
8	崔颖		8	24	3.0	4.0
9	张月	大连医科大学生化教研室	1	1	1.0	1.0
10	王辉		2	1	1.0	1.0