AMPKα2基因克隆及其野生型和突变型真核表达载体的构建

• 作者: 丁鹤林 李芳萍 程桦 罗招凡
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: AMPKα2 克隆 突变 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2009,（28）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 5554-5557
• 页数: 4页
• 分类号: R349.83
• 字数: 4401字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.28.032

摘要

背景:实验表明,通过激活单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMP-Activated Protein Kinase, AMPK)α2可以增加胰岛素的敏感性和骨骼肌葡萄糖的摄取,其有望成为预防和治疗2型糖尿病的新的生理和药理作用靶点.目的:克隆人的AMPKα2基因,并构建其野生型和突变型真核表达载体.设计:单一样本观察.时间及地点:实验于2007-04/2008-01在中山大学附属第二医院临床分子生物实验室完成.材料:QuikChange Ⅱ Site-Directed Mutagenesis Kit为Stratagene公司产品.真核表达载体pcDNA3.1(+),大肠杆菌DH5α为实验室保存.人骨胳肌组织来源于中山大学附属第二医院手术截肢患者,获患者知情同意,新鲜取材后液氮冷冻.方法:采用反转录一聚合酶链反应技术从人骨骼肌扩增AMPKα2基因,并将其克隆到T载体,通过测序对其进行鉴定.采用Quickchange定点诱变试剂盒对AMPKα2基因进行体外定点诱变,并将其野生和突变的编码基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,通过酶切和测序进行鉴定.主要观察指标:①目的基因的克隆.②定点诱变.③真核表达质粒的构建.结果:成功克隆了AMPKα2基因,大小约1 700 bp,与已发表的AMPKα2同源性为99%,GenBank录入号EF056019.成功将AMPKα2第45位Lysine(AAA)突变为Arginine(AGA),成功构建了野生型和突变型pcDNA-AMPK α2重组质粒.结论:实验成功克隆了AMPKα2基因,构建了其野生型和突变型真核表达载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗招凡	中山大学附属第二医院检验科	44	166	8.0	11.0
2	李芳萍	中山大学附属第二医院内分泌科	53	246	9.0	13.0
3	丁鹤林	中山大学附属第二医院检验科	51	266	10.0	13.0
4	程桦	中山大学附属第二医院内分泌科	113	817	15.0	23.0