新合成壳聚糖季铵盐/DNA复合物在Hela细胞中的转染效率

• 作者: 初立秋 程静 谭惠民 赵信岐 郑伟 陈煜
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 壳聚糖季铵盐 基因载体 Hela细胞 转染
• 年，卷（期）: 2009,（38）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 7437-7441
• 页数: 5页
• 分类号: R318
• 字数: 5342字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn 1673-8225.2009.38.007

摘要

背景:壳聚糖季铵盐衍生物可以提高载体的转染效率,同时解决了壳聚糖溶解性差的问题,扩展了其pH值适用范围.目的:合成一种新型壳聚糖季铵盐载体,研究其与质粒结合的条件及转染效率,并与壳聚糖进行对比.设计、时间及单位:分子生物学,对比观察实验,于2008-08/10在浙江大学医学院附属第二医院完成.材料:壳聚糖季铵盐-N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖为北京理工大学高分子材料实验室合成.质粒pEGFP-C1为浙江大学医学院郑一春惠赠.Hela细胞为浙江大学医学院程静提供.方法:将N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖配制成质量浓度为0.2 g/L、pH值为5.5(或6.9、7.6)、乙酸钠终浓度为50 mmol/L的乙酸溶液,迅速与质粒pEGFP-C1混合,并在旋转混合器上涡流15～30 S,室温静置30 min以上,促进复合物的形成.主要观察指标:通过凝胶阻滞实验研究了pH值及时间对壳聚糖季铵盐与质粒结合能力的影响.通过荧光倒置显微镜观察壳聚糖季铵盐作为载体转染Hela细胞的效率,并与壳聚糖进行对比.结果:N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖能够在酸性、中性及碱性条件下溶解,并能够与质粒DNA很好的结合形成复合物,拓展了其使用范围.在酸性条件下,N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖与质粒的结合作用强于壳聚糖.壳聚糖及N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖在酸性条件下,30 min即可与质粒形成稳定的复合物,并在12 h内保持良好的稳定性.Hela细胞的体外转染结果表明,N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的转染效率大于壳聚糖.结论:N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖所适用的pH值范围较壳聚糖更加广泛,其稳定性与壳聚糖无明显差别,并且对Hela细胞的体外转染效率略高于壳聚糖,值得对其进行更深入的研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭惠民	北京理工大学材料科学与工程学院	309	4391	32.0	46.0
2	初立秋	北京理工大学材料科学与工程学院	9	78	6.0	8.0
3	陈煜	北京理工大学材料科学与工程学院	68	784	15.0	25.0
4	赵信岐	北京理工大学材料科学与工程学院	46	196	6.0	10.0
5	郑伟	北京理工大学材料科学与工程学院	7	203	5.0	7.0
6	程静	北京理工大学材料科学与工程学院	1	8	1.0	1.0