色素上皮衍生因子基因的克隆以及与肺癌细胞生长和肿瘤新生血管形成影响的研究

• 作者: Wen G Jiang 张力建 张建芝 赵威 陈晋峰
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肺肿瘤 色素上皮 眼 新生血管化 病理性
• 年，卷（期）: 2009,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 485-490
• 页数: 6页
• 分类号: R73
• 字数: 5371字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2009.07.014

摘要

目的 克隆并在肺癌细胞SKMES1中表达色素上皮衍生因子(PEDF)蛋白;在体实验中观察PEDF蛋白过表达后对肺癌细胞生长和肿瘤相关性新生血管形成的影响.方法 通过PCR技术扩增出可以表达PEDF蛋白的全长基因;利用基因重组技术与pEF6/v5-His质粒连接后构建出PEDF基因过表达载体PEDFexp;将PEDFexp载体转染SKMES1肺癌细胞,建立稳定过表达PEDF蛋白的肺癌细胞株;将过表达PEDF蛋白的肺癌细胞接种于鸡胚,在体实验中明确PEDF蛋白过表达后对肺癌细胞生长和肿瘤新生血管形成的影响.结果 从人体组织的cDNA中成功扩增出PEDF全长序列,并正确构建了可以表达PEDF蛋白的载体,基因测序证实所构建的质粒载体中正确连接了没有核苷酸突变的目的 片段;RT-PCR和Western印迹实验在RNA和蛋白水平证实,稳定转染PEDFexp质粒的肺癌细胞与对照组肺癌细胞相比可以过表达PEDF蛋白.鸡胚实验证实PEDF基因过表达后,SKMES1PEDFexp肺癌细胞形成病灶的体积明显小于对照组[(0.10 ±0.05)cm3vs(0.17±0.07)cm3](P=0.016);SKMES1PEDFexp肺癌细胞形成病灶的质量也明显小于对照组细胞[(0.008±0.004)mg vs(0.024±0.009)mg](P=0.006).肿瘤相关新生血管计数结果 显示,PEDF基因的过表达后,肿瘤病灶中一级血管的数量明显少于对照组细胞(15±3 vs 41±9)(P<0.001);二级血管的数量也明显少于对照组细胞(75±22 vs 175±39)(P=0.001).结论成功构建出含有PEDF基因表达载体,为研究PEDF基因在肺癌中的功能奠定了基础.PEDF蛋白在肺癌生长以及肿瘤血管形成过程中的抑制作用说明PEDF蛋白是一种非常有前途的具有肺癌治疗作用的生物药物.