碱性成纤维细胞生长因子基因转染免骨髓间充质干细胞

• 作者: 吴迪 朱晓松 李世和 杨浩 王少云 董坚 赵宏斌
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 碱性成纤维细胞生长因子 骨髓间充质干细胞 基因转染
• 年，卷（期）: 2009,（49）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 9687-9691
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 6030字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/J.issn.1673-8225.2009.49.016

摘要

背景:碱性成纤维细胞生长因子对于创伤修复具有明显的促进作用,但局部应用难以持久地发挥作用.目的:观察碱性成纤维细胞生长因子基因转染至兔骨髓间充质干细胞后的表达情况.设计、时间及地点:细胞基因学体外观察,于2009-03/08在云南大学生命科学院完成.材料:日本大耳白兔1只,购于昆明医学院动物科.pCDNA3.1质粒为美国Invitrogen产品.方法:抽取兔髂前上棘骨髓,采用贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞,待细胞融合至培养瓶底80%时消化传代.参考GeneBank碱性成纤维细胞生长因子cDNA序列设计合成基因,电泳纯化后xhol I、BamH I双酶切回收凝胶,以限制性核酸内切酶对PcDNA Vector质粒进行酶切、电泳和凝胶回收,连接碱性成纤维细胞生长因子DNA与PcDNA Vector质粒,构建pCDNA-碱性成纤维细胞生长因子真核表达载体,运用脂质体转染法将重组体转染至兔骨髓间充质干细胞中,并筛选稳定转染株.主要观察指标:骨髓间充质干细胞表面抗原的表达,Western blot法检测目的蛋白的表达.结果:流式细胞仪检测结果示所培养细胞表面抗原呈CD90,CD44阳性,CD45呈阴性;免疫组化检测结果示骨髓间充质干细胞血管源性细胞表面抗原CD34呈阴性,而相对特异性标记物CD44呈阳性.转染碱性成纤维细胞生长因子的骨髓间充质干细胞提取的细胞裂解液中,在M_r 23 000处有一条明显阳性杂交带;而转染pCDNA3.1(-)空载体的骨髓间充质干细胞提取蛋白未见阳性条带.结论:实验成功地将碱性成纤维细胞生长因子基因转染至兔骨髓间充质干细胞,该目的基因可稳定表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董坚	昆明医学院第一附属医院生物治疗中心	56	254	8.0	12.0
2	朱晓松	昆明医学院第一附属医院骨科	28	113	6.0	9.0
3	李世和	昆明医学院第一附属医院骨科	82	637	15.0	21.0
4	杨浩	昆明医学院第一附属医院骨科	17	96	5.0	9.0
5	吴迪	昆明医学院第一附属医院骨科	38	111	6.0	8.0
6	赵宏斌	昆明医学院第一附属医院骨科	41	328	12.0	15.0
7	王少云	昆明医学院第一附属医院骨科	5	10	2.0	3.0