改良法体外培养脐带血间充质干细胞及其生物学特性分析析☆

• 作者: 刘宪民 刘松波 王琪 祖启明 苟三怀 项良碧
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 脐带血间充质干细胞 体外培养 免疫农型 分化
• 年，卷（期）: 2009,（32）
• 所属期刊栏目: 干细胞培养与分化
• 页码范围: 6383-6387
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 1170字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.32.038

摘要

背景:目前报道的脐带血间充质干细胞分离成功率较低,且缺乏较为统一的鉴定方法.目的:对传统的体外分离培养脐带血问充质干细胞方法加以改良,以提高细胞培养成功率,并进行生物学特性观察.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006-04/2007-01在上海交通大学医学院附属第九人民医院完成.材料:取自足月健康顺产新生儿的脐带血标本28份,由上海市红房子医院产科提供,经产妇和家属同意.方法:无菌条件下取新牛儿脐带血,以密度梯度离心法分离单个核细胞,以含体积分数为10%胎牛血清的α-MEM培养基进行体外培养,原代培养5～7 d后半量换液,后每隔三四天全量换液一次.待细胞贴壁后,按处理方法不同分为2组:改良1组当皿底圆形巨核细胞融合、梭形成纤维样细胞脱落时将细胞悬液移入新的皿中培养:改良2组待皿底圆形巨核细胞渐渐占据优势时,将培养基换为含体积分数为15%小牛血清的α-MEM培养液,当圆形巨核细胞大部脱落后换回含体积分数为10%胎牛血清的α-MEM培养基.取第5代脐带血间充质干细胞,进行体外成骨及成脂诱导.主要观察指标:显微镜下观察脐带血间充质干细胞的形态,流式细胞仪测定细胞免疫表型,碱性磷酸酶染色及油红染色检测绌胞诱导分化能力.结果:28份脐带血中20份培养出贴壁细胞(改良1组6份/10份,改良2组14份/18份),其中13份培养出能融合且可稳定传代的成纤维样细胞(改良1组4份,改良2组9份),成功率为46.4%,可传至22代且形态无变化,强烈表达CD105、CD29等问充质干细胞表面标志,而CD34、CD45和CD106等呈阴性表达.在特定诱导条件下,脐带血间充质干细胞可分化为成骨细胞和脂肪细胞.结论:脐带血中存在问充质干细胞,具有多向分化潜能,且易于体外扩增、传代稳定,体外培养方法经改良后可提高脐带血间充质干细胞的培养成功率.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘宪民	解放军沈阳军区总医院骨科	10	77	3.0	8.0
2	祖启明	解放军沈阳军区总医院骨科	26	140	6.0	11.0
3	苟三怀	上海长征医院骨科	16	69	6.0	7.0
4	刘松波	解放军沈阳军区总医院骨科	7	61	3.0	7.0
5	项良碧	解放军沈阳军区总医院骨科	30	121	6.0	8.0
6	王琪	解放军沈阳军区总医院骨科	6	20	3.0	4.0