MAGE-3-HSP70融合基因真核表达载体的构建与鉴定

• 作者: 刘东京 刘刚 吴季霖 张阳德 段菁华 陈伟 陈玉祥
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 肿瘤-睾丸抗原 黑色素瘤抗原3 热休克蛋白70 细胞毒性T淋巴细胞
• 年，卷（期）: 2009,（41）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 8065-8069
• 页数: 5页
• 分类号: R318
• 字数: 4953字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.41.013

摘要

背景:疫苗诱导的抗肿瘤CD8+T细胞反应被认为在增加机体对肿瘤抵抗力方面起重要作用.研究发现,抗原递呈细胞摄取热休克蛋白70与肿瘤相关抗原的融合蛋白,并在MHC Ⅰ类分子上处理提呈有此热休克蛋白为伴侣的肽后,会启动CD8+细胞毒性T淋巴细胞反应.目的:构建黑色素瘤抗原3(MAGE-3)、人热休克蛋白70(HSP70)融合基因的真核表达载体.设计、时间及地点:单一样本观察,于2008-06/12在国家卫生部纳米生物技术重点实验室完成.材料:pcDNA3.1(-)Vector为BD公司产品,pINCY/MAGE-3,pOTB7/HSP70为Open Biosystems公司产品,DH5α由纳米生物技术重点实验室保存.方法:设计含Xho Ⅰ酶切位点MAGE-3引物及含Kpn Ⅰ酶切位点人热休克蛋白70引物,以pINCY/MAGE-3和pOTB7/HSP70为模板扩增黑色素瘤抗原3和人热休克蛋白70基因片段,以基因片段为模板,采用MAGE-3上游引物(含Xho Ⅰ酶切位点)及人热休克蛋白70下游引物(含Kpn Ⅰ酶切位点),PCR扩增MAGE-3-HSP70融合基因片段,Kpn Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切并连接至pcDNA3.1(-),转化感受态大肠杆菌DH5α,获得阳性克隆进行双酶切和测序鉴定.主要观察指标:真核表达载体pcDNA3.1(-)IMAGE-3+HSP70的鉴定.结果:测序结果显示黑色素瘤抗原3与Gene Bank上公布的序列完全一致,人热休克蛋白70有3处同义突变.结论:成功构建MAGE-3-HSP70融合基因真核表达载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张阳德	中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心	556	4187	26.0	40.0
2	陈伟	中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心	149	828	15.0	20.0
3	刘刚	中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心	84	517	12.0	19.0
4	吴季霖	中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心	2	5	2.0	2.0
5	段菁华	中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心	6	6	2.0	2.0
6	刘东京	中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心	6	37	3.0	6.0