重组人骨形态发生蛋白2在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化

• 作者: 何盛为 孙传秀 张路 方旭 杜广宇 米立东 赵文志
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨形态发生蛋白2 基因表达 组织构建
• 年，卷（期）: 2009,（7）
• 所属期刊栏目: 组织构建与生活性因子
• 页码范围: 1267-1270
• 页数: 4页
• 分类号: R329
• 字数: 4253字
• 语种: 中文

摘要

背景:骨形态发生蛋白是一类调节骨组织发育的生长因子,其中骨形态发生蛋白2诱骨活性最强,在骨组织工程研究中需要大量的骨形态发生蛋白2.目的:克隆表达骨形态发生蛋白2基因,并进行蛋白表达及蛋白纯化定量.设计、时间及地点:单一样奉观察,于2008-05/07在宝牛物工程(大连)有限公司开放实验室完成.材料:表达载体pET28a Vector及相应的宿主细胞E.coil BL21(DE3)购于Novagen公司;分子伴侣质粒pTF16、pGr07、PKJE7购于宝生物工程(大连)有限公司.方法:利用基因重组技术,优化片人工合成骨形态发生蛋白2基因,亚克隆至含T7启动子的原核表达载体pET28a中,构建表达载体pET-BMP.将重组质粒pET-BMP与3种含分子伴侣质粒共转入宿主菌E.coil BL21(DE3)中,用IPTG进行诱导表达.菌体经超声波破碎,镍柱亲和层析纯化并定量.主要观察指标:①3种表达质粒的表达及町溶性检测及表达上清的westem blotting检测.②pET-BMPg的纯化.结果:在表达宿主菌中,骨形态发生蛋白 2基因获得了高效表达,其中一组为可溶性表达,表达产物经亲和层析纯化后,可溶性表达量达12.18 mg/L培养基.结论:人骨形态发生蛋白2基凼能在PET表达系统中得到高效可溶性表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杜广宇	大连医科大学附属第二医院北院骨外科	13	43	4.0	5.0
2	赵文志	大连医科大学附属第二医院北院骨外科	49	314	10.0	15.0
3	何盛为	大连医科大学附属第二医院北院骨外科	27	126	6.0	10.0
4	米立东	大连医科大学附属第二医院北院骨外科	15	45	4.0	5.0
5	孙传秀	大连医科大学附属第二医院北院骨外科	13	37	4.0	5.0
6	方旭	大连医科大学附属第二医院北院骨外科	17	110	6.0	10.0