C_(57)BL小鼠survivin基因miRNA表达载体的构建

• 作者: 何卫阳 杨华安 王海峰 苟欣 黎衍敏
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: C_(57)BL小鼠 miRNA pcDNA~(TM)6.2-GW/EmGFPmiR RNA干扰 survivin
• 年，卷（期）: 2009,（53）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 10491-10494
• 页数: 4页
• 分类号: R318
• 字数: 3386字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.53.019

摘要

背景:Survivin在多种肿瘤组织中的高表达,具有调节细胞增殖分裂和强大的抗凋亡功能.目的:利用RNA干扰技术,构建具有特异性阻断C_(57)BL小鼠survivin基因的微小RNA(micro RNA,miRNA)表达载体.设计、时间及地点:单一样本观察,于2008-06/11在重庆医科大学附属第一医院神经内科实验中心完成.材料:环形pcDNA~(TM)6.2-GW/EmGFPmiR和BLOCK-iT~(TM) Pol II miR RNA干扰 Expression Vector Kit with EmGFP为Invitrogen公司产品;DH5a大肠杆菌为实验室保存;xho I和BamH I酶、壮观霉素均为上海生工生物工程有限公司产品.方法:应用设计软件在C_(57)BL小鼠survivin基因的mRNA上寻找特异性的短核苷酸序列,并设计合成4对寡核苷酸序列,经退火后形成双链DNA片段,采用基因克隆技术,将其克隆到pcDNA~(TM)6.2-GW/EmGFPmiR的载体中,转化DH5a大肠杆菌,挑单菌落种于含有壮观霉素LB液体培养基中,提取质粒.主要观察指标:应用测序法和琼脂糖电泳检测对重组体进行鉴定.结果:测序结果显示插入片段与线性载体连接正确,无碱基突变、缺失、插入等异常.双酶切处理pcDNA~(TM)6.2-GW/EmGFP-miR重组质粒结果显示片段大小与预期相符.结论:实验结果表明成功构建了C_(57)BL小鼠survivin基因的微小RNA表达载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苟欣	重庆医科大学附属第一医院泌尿外科	194	861	13.0	19.0
2	何卫阳	重庆医科大学附属第一医院泌尿外科	81	413	10.0	16.0
3	杨华安	重庆医科大学附属第一医院泌尿外科	12	60	4.0	7.0
4	王海峰	重庆医科大学附属第一医院泌尿外科	3	1	1.0	1.0
5	黎衍敏	重庆医科大学附属第一医院泌尿外科	3	2	1.0	1.0