白细胞相关免疫球蛋白样受体2(CD306)真核表达载体构建及蛋白的纯化与鉴定

• 作者: 康振华 李妍 王春艳 谢鑫 金伯泉
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: LAlR-2 CD306 真核表达 蛋白 鉴定
• 年，卷（期）: 2009,（50）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 9928-9932
• 页数: 5页
• 分类号: R318
• 字数: 5464字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.50.026

摘要

背景:目前国内外对白细胞相关免疫球蛋白样受体(leukocyte-associated immunoglobulin like-receptor,LAIR)家族中LAIR1 的生物学功能研究已较清晰,而关于LAIR-2分子在机体内的生物学功能尚缺乏相关报道.目的:为进一步研究LAlR-2的体内生物学功能,构建其真核表达载体,纯化并鉴定蛋白.设计、时间及地点:单一样本观察实验,于2007-06/2008-06在解放军第四军医大学完成.材料:载体pig/3c由英国牛津大学徐小宁博士惠赠.载体pcDNA3.1由荷兰Meyaard博士惠赠.中国仓鼠卵巢细胞系CHO由解放军第四军医大学免疫学教研室冻存.方法:构建plg/3c-LAIR-2及pcDNA3.1-LAIR-2两个真核表达载体,电转染法转染CHO细胞建立稳定表达LAIR-2-Fc融合蛋白及LAIR-2全长蛋白分子的细胞株,通过Western blot、细胞免疫化学、流式细胞术分析实验鉴定真核表达LAIR-2蛋白分子与抗原核表达LAIR-2 mAbs的结合活性.主要观察指标:稳定转染细胞系的建立及真核表达蛋白的纯化和鉴定.LAIR-2蛋白与相应单克隆抗体的结合活性.结果:构建真核表达载体并成功转染CHO细胞,建立稳定分泌LAIR-2-Fc融合蛋白的转染细胞系及稳定分泌LAIR-2蛋白的转染细胞系,分别命名为CHO/LAIR-2-Fc以及CHO/LAIR-2.Western blot实验表明真核表达的LAIR-2全长蛋白分子均可与三株抗LAIR-2 mAb 1A7、3H12及4A9发生特异性结合反应.免疫细胞化学、流式细胞术分析实验结果表明抗原核细胞表达蛋白的三株LAIR-2单克隆抗体中,1A7不能结合pcDNA3.1-LAIR-2转染的CHO细胞内的LAIR-2,面3H12和4A9均可以很好结合细胞内的LAIR-2.结论:实验成功构建了plg/3c-LAIR-2及pcDNA3.1-LAIR-2两个真核表达载体,成功转染CHO细胞并建立稳定表达LAIR-2-Fc融合蛋白及LAIR-2全长蛋白分子的细胞株.真核表达的LAIR-2蛋白分子与抗原核表达的LAIR-2 mAbs有良好的结合活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王春艳	吉林医药学院病原教研室	43	88	5.0	6.0
2	李妍	吉林医药学院病原教研室	82	159	6.0	9.0
3	康振华		3	3	1.0	1.0
4	金伯泉	解放军第四军医大学免疫学教研室	8	20	2.0	4.0
5	谢鑫	西安医科大学免疫教研室	1	0	0.0	0.0