人瘢痕疙瘩成纤维细胞IKKβ特异性siRNA的筛选和载体构建

• 作者: 孙瑞霞 张阳 柳大烈 陈伯华
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 瘢痕疙瘩 成纤维细胞 核转录因子kB 抑制蛋白激酶β
• 年，卷（期）: 2009,（20）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 3920-3923
• 页数: 4页
• 分类号: R619.6
• 字数: 4414字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.20.025

摘要

背景:近年来的研究表明核转录因子k B通过调控多种基因的表达,参与细胞生长、发育、凋亡等多种生理功能,并在细胞恶性转化、纤维化等方面起重要作用.核转录因子k B抑制蛋白激酶(inhibitor of kappa B kinase,IKK)β是核转录因子k B 激活通路中的关键激酶,被抑制后可以阻断核转录因子k B的活化过程,通过siRNA干扰沉默IKKβ基因,下调核转录因子k B.目的:体外合成并筛选人瘢痕疙瘩成纤维细胞特异性IKK β-siRNA,并构建其表达载体.设计、时间及地点:细胞观察实验,于2008-04/2008-10在解放军广州军区总医院中心实验室完成.材料:细胞来源为珠江医院整形外科25～40岁患者切除的瘢痕疙瘩标本,患者知情同意.方法:化学合成3条IKKβ.siRNA,分别转染体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,采用反转录-聚合酶链反应技术检测所合成的SiRNA对IKKβ表达的抑制,筛选出特异性IKKβ-siRNA,并采用PU6质粒构建载体.主要观察指标:①RT-Q-PCR检测结果.②载体基因连接产物酶切鉴定.③重组质粒测序鉴定.结果:经实时定量反转录-聚合酶链反应检测,合成的3条IKKβ-siRNA链中,IKKβ-siRNA-2有明显抑制IKKβmRNA表达的作用,IKKβ-siRNA-1、IKKβ-siRNA-3干扰效果不明显.并通过酶切鉴定和测序结果证明成功构建IKKβ-siRNA载体.结论:应用反转录-聚合酶链反应可筛选出针对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的特异性IKK β-siRNA=可构建具有干扰效果的IKKβ-siRNA表达载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	柳大烈	南方医科大学珠江医院整形外科	177	1288	16.0	25.0
2	陈伯华	南方医科大学珠江医院整形外科	11	104	4.0	10.0
3	张阳	解放军第四五八医院整形外科	21	74	4.0	8.0
4	孙瑞霞	南方医科大学珠江医院整形外科	1	3	1.0	1.0