有双重活性的重组胸腺素α1与复合α干扰素融合蛋白的分离纯化

• 作者: 刘先俊 刘方欣 周辉云 黎波
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 复合α干扰素 胸腺素α1 融合蛋白 重组 活性
• 年，卷（期）: 2009,（24）
• 所属期刊栏目: 组织构建相关实验造模
• 页码范围: 4796-4800
• 页数: 5页
• 分类号: R392.114
• 字数: 1763字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.24.043

摘要

背景:研究表明,将干扰素与胸腺素α 1联合应用可增强干扰素的抗病毒作用.目的:获得既具有干扰素抗病毒活性又有胸腺素α 1增强免疫功能的双重活性重组融合蛋白.设计、时间及地点:体外对比试验,于2003-03/2004-12在重庆康尔威药业股份有限公司药物研究所完成.材料:融合基因片断由上海生工合成,人羊膜细胞、水泡性口炎病毒购自上海生化与细胞生物所,对照品IFNα1b、IFNα2a和胸腺素α1为市售药品.方法:选择大肠杆菌偏爱的密码子,将合成的胸腺素α 1与复合干扰素编码序列构成的融和基因克隆至大肠杆菌表达载体pET-22b(+)、在宿主菌BL21(DE3)-Codonplus-RP-X中表达融合蛋白.通过硫酸铵沉淀、疏水层析、阴离子交换层析、阳离子交换层析、分子筛层析等方法进行分离纯化.采用细胞病变抑制法测定融合蛋白的抗病毒活性,采用细胞增殖实验检测融合蛋白对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响.主要观察指标:重组融合蛋白抗病毒的活性和促小鼠脾淋巴细胞增殖活性.结果:①在大肠杆菌中表达的融合蛋白呈胞内可溶性表达,表达量占细菌总蛋白的20%以上.②纯化后,融合蛋白的纯度达96%以上.③融合蛋白的抗病毒活性优于市售的IFN α 1b、IFN α 2a.④融合蛋白的促淋巴细胞增殖活性与市售胸腺素α 1相似.结论:在大肠杆菌中表达的胸腺素α 1与复合干扰素融合蛋白既具有干扰素抗病毒活性又有胸腺素α 1的增强免疫功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘方欣		22	53	5.0	6.0
2	刘先俊		26	103	5.0	8.0
3	黎波		2	6	1.0	2.0
4	周辉云		3	11	2.0	3.0