大鼠嗅球嗅鞘细胞的体外分离培养及纯化

• 作者: 孙家行 李青松 王建交 葛云龙 赵岩 郑永日 郭冕
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 嗅鞘细胞 分离 培养 纯化
• 年，卷（期）: 2009,（40）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 7838-7842
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 5164字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.40.006

摘要

背景:差速贴壁+Thy1.1抗体及补体纯化法的应用较多,细胞换液过程中使用含血清的培养基主要针对成纤维细胞的去除,而对神经元的去除作用不明显.目的:根据神经元体外培养需要血清的特性,拟利用无血清培养基在体外建立一种分离培养嗅鞘细胞的简单方法.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-06/2009-01在哈尔滨医科大学动物实验中心完成.材料:成年SD大鼠10只,由哈尔滨医科大学实验动物中心提供.方法:在差速贴壁+Thy1.1抗体及补体纯化法的基础上,剪开大鼠颅骨,显露位于颅腔前方的嗅球,取出2只嗅球,在显微镜下去除嗅球表面的软脑膜和毛细血管及外周组织,保留富含嗅鞘细胞的嗅神经层和嗅球颗粒层,剪成1 mm3小块分离获取单细胞悬浮液,调整细胞密度至1×107L-1,接种在用poly-l-lysine包被的培养瓶或培养板中,于37℃、体积分数为5%的CO2培养箱中培养,第3天用无血清DMEM/F12培养基换液培养.主要观察指标:嗅鞘细胞的形态学观察、生长曲线分析、免疫荧光染色结果.结果:培养前3 d细胞数目无明显增加,甚至减少;然后细胞数目逐渐增多,13d细胞基本长满;传10代后细胞形态发生明显变化,胞浆内出现许多空泡,细胞增殖速度减慢或停止.纯化培养10 d后,培养板内双极和三极细胞均呈GFAP,NGFRp75阳性.结论:在差速贴壁+Thy1.1抗体及补体纯化法的基础上,利用无血清DMEM/F12培养基进行换液培养可使嗅鞘细胞迅速增殖,是一种效率较高的体外培养方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑永日	哈尔滨医科大学附属第二医院神经外科	35	199	8.0	12.0
2	郭冕	哈尔滨医科大学附属第二医院神经外科	7	12	2.0	3.0
3	李青松	哈尔滨医科大学附属第二医院神经外科	8	37	4.0	5.0
4	王建交	哈尔滨医科大学附属第二医院神经外科	19	72	6.0	7.0
5	孙家行	哈尔滨医科大学附属第二医院神经外科	7	21	3.0	4.0
6	葛云龙	哈尔滨医科大学附属第二医院神经外科	8	68	5.0	8.0