马蓝基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化

• 作者: 周以飞 潘大仁 王占成 陈隽 黄以钟
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 农学
• 关键词: 马蓝 RAPD DNA 反应体系
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术科学
• 页码范围: 53-57
• 页数: 5页
• 分类号: S567.23
• 字数: 3512字
• 语种: 中文

摘要

以马蓝为研究材料,对马蓝基因组DNA的提取以及RAPD-PCR反应体系进行了优化.结果表明,在提取液中加入PVP和β-巯基乙醇去除酚类物质,采用高盐沉淀DNA和多次洗涤去除糖类,可以得到高质量的马蓝基因组DNA.电泳检测结果表明,所获得的DNA完整,无降解,完全可以满足RAPD等分子标记分析的需要.同时对马蓝RAPD-PCR反应体系中各个影响因素进行了优化,建立了适合马蓝RAPD分子标记的最佳反应体系,即20 μl反应体系中含有1.25 U TaqDNA聚合酶,0.25 mmol/LdNTP,2.5mmol/L Mg2+,50 ng模板DNA,1.0 μmol/L引物;反应程序中最佳退火温度为38℃.