摘要:
背景:脂肪组织来源干细胞是位于脂肪荩质内的一种细胞,具有多向分化潜能,可以定向分化成多种细胞类型.目的:探索兔脂肪组织来源干细胞体外生长特性及胶原酶消化适宜条件.设计、时间及地点:细胞分子生物学实验,2008 05/09在解放军南京军区福州总医院比较医学科及实验科完成.材料:日本大耳白兔5只.Ⅰ型胶原酶为美国Worthington公司产品,低糖DMEM/F12培养液为美国Gibco公司产品.方法:兔颈后部皮下脂肪取材,采用Ⅰ胶原酶消化法获取细胞,按Ⅰ型胶原酶消化质量浓度分为1.0,1.5,2.0 g/L 3组,每组再按消化时间分为0.5,1,1.5 h3个亚组.脂肪组织剪碎混匀后均分为9等分,最后重悬细胞终体积均定为2mL并计数,每个亚组计数6次,共取5次脂肪组织,采用含血清的DMEM培养液体外培养细胞.主要观察指标:细胞体外生长特性并比较不同胶原酶浓度、胶原酶消化时间对兔脂肪来源干细胞体外培养的影响.结果:采用1.0,1.5,2.0 g/L三种不同胶原酶浓度进行消化,发现在消化时间为0.5 h和1 h时,2.0 g/L组消化细胞总数最多,细胞总数与其他组比较.差异有显著性意义(P<0.01).在消化时间为1.5 h时,消化细胞总数较0.5 h和1 h均有增加,同时,1.0,1.5,2.0 g/L组消化细胞总数无统计学差异,活细胞比值1.0g/L组最高,但与其他组无统计学差异,观察第3代细胞生长特性,1.0 g/L消化1.5 h组别具有更好的增殖活性.结论:脂肪来源干细胞具有较强的自我更新能力,对于兔脂肪组织来源干细胞,胶原酶浓度1.0 g/L、消化时间1.5 h是最佳的抉取条件.