胰岛素样生长因子结合蛋白3增强子元件(IEE)的生物学特征

• 作者: 任文君 吕小凤 毛泽斌 王群义 蒋晓刚
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 胰岛素样生长因子结合蛋白3 IEE(IGFB-3 enhancer element) 2BS细胞
• 年，卷（期）: 2009,（20）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 3957-3961
• 页数: 5页
• 分类号: R392.114
• 字数: 5777字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.20.033

摘要

背景:在细胞水平,胰岛素样生长因子结合蛋白3竞争性地与胰岛素样生长因子结合阻止了胰岛素样生长因子与其受体结合,从而抑制了胰岛素样生长因子的活性.目的:观察衰老细胞中调节性蛋白质胰岛素样生长因子结合蛋白3的生物学特征.设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-09/2007-09在西安交通大学生物医学信息工程教育部重点实验室完成.材料:人胚肿二倍体成纤维细胞(2BS)购于中国生物制品研究所.方法:用Northern的方法显示胰岛素样生长因子结合蛋白3基因的表达在年轻和衰老的2BS细胞中存在差异:聚合酶链反应扩增出人类胰岛素样生长因子结合蛋白3上游包括5'-UTR区的2kb的序列,并用酶切得到4组不同长短的胰岛素样生长因子结合蛋白3启动子片段并确定可调控转录活性的区域;通过重叠寡核苷酸凝胶阻滞实验确定在该活性区域中的增强子元件-IEE(IGFBP-3 enhancerelement)及其与蛋白结合的碱基序列等;用DNase I Footprinting法确定了IEE中与蛋白结合的核心序列.主要观察指标:①胰岛素样生长因子结合蛋白3基因在年轻和衰老细胞中的表达差异.②通过重叠寡核苷酸确定增强子元件.③通过凝胶阻滞试验证实该复合物结合活性与衰老相关的.④通过凝胶阻滞试验确定IEE与蛋白结合的碱基序列.⑤用DNase I Footprinting法确定IEE中与蛋白结合的核心序列.⑥判断与IEE结合蛋白的相对分子质量.结果:与年轻的2BS细胞相比,衰老的2BS细胞中胰岛素样生长因子结合蛋白3基因的表达升高:5'-ccagcctgccaa gca gcg tgcCCCggttgc-3'是胰岛素样生长因子结合蛋白3的增强子元件;该元件与蛋白结合的核心序列是CTG CCA和GCGTGC CCC G,而且这种结合是与衰老相关的:结合蛋白的相对分子质量大约在27 000.结论:在2BS细胞中发现了一个新的转录增强子,它与蛋白结合的核心序列是CTGCCA和GCG TGC CCC G,可与一个大约27 000的蛋白结合:在衰老细胞中可选择性地促进胰岛素样生长因子结合蛋白3的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蒋晓刚	西安交通大学医学院遗传与分子生物学系	9	26	3.0	5.0
2	毛泽斌	北京大学医学部基础医学院生化系	32	127	5.0	10.0
3	王群义	西安市第二医院普外科	2	1	1.0	1.0
4	吕小凤	北京大学医学部基础医学院生化系	2	1	1.0	1.0